百萤 Cell Counting Kit-8(cck-8)----细胞增殖与活性检测的专家

• Cell Counting Kit-8(cck-8)细胞增殖与活性检测试剂盒工作原理

Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 细胞增殖与活性检测试剂盒是百萤生物生产的一种基于 WST-8 的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。其主要成分为水溶性四唑盐 WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)，WST-8 是一种类似于 MTT 的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的水溶性的甲臜（formazan)。WST-8 被细胞内脱氢酶生物还原后生成的甲臜能够直接溶解在培养基中。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅;颜色的深浅与细胞的增殖成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450mM波长处测定OD值，间接反映活细胞数量。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

图1.CCK-8检测细胞活性原理图

• Cell Counting Kit-8(cck-8)细胞增殖与活性检测试剂盒适用范围

本试剂盒可以用于生物活性因子的活性检测、抗肿瘤药物的筛选、细胞增殖的测定、细胞毒性检测以及药敏等与细胞活性和增值相关的实验。

• 下表是CCK法与其他细胞增殖/毒性检测方法的优势比较

（1）MTT法：MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。

（2）MTS法：以生成有色化合物的显色反应为基础，比色分析对显色反应的基本要求是：反应应具有较高的灵敏度和选择性，反应生成的有色化合物的组成恒定且较稳定，它和显色剂的颜色差别较大。选择适当的显色反应和控制好适宜的反应条件，是比色分析的关键。

（3）SRB法：磺酰罗丹明B(Sulforhodamine B，SRB)比色法，主要用来检测细胞增殖情况。SRB是一种粉红色阴离子染料，易溶于水，在酸性条件下可特异性地与细胞内组成蛋白质的碱性氨基酸结合；在510 nm左右波长下产生吸收峰，吸光值与细胞量成线性正相关，故可用作细胞数的定量检测。

（4）XTT法：XTT是一种与MTT类似的四唑氮衍生物，可被活细胞线粒体脱氢酶还原成水溶性的棕色甲肷产物，当XTT与电子偶合剂共同使用时，甲肷的生成量与细胞的增殖程度呈正相关。

（5）WST-1法：WST-1是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的甲臜（Formazan）。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。WST-1是MTT的一种升级替代产品，和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。

• Cell Counting Kit-8(cck-8)细胞增殖与活性检测试剂盒 活力计算

细胞活力*（％）=[A(加药)-A（空白）]/[A（0加药）-A（空白）] ×100

A（加药）：具有细胞、CCK8溶液和药物溶液的孔的吸光度
A（空白）：具有培养基和CCK8溶液而没有细胞的孔的吸光度
A（0加药）：具有细胞、CCK8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
*细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力

CCK-8实验中的关键点（供参考）：

（1）种板数；

（2）种板后细胞的贴壁生长时间；

（3）加药后的孵育时间；

（4）CCK-8试剂加入量；

（5）CCK-8试剂加入后细胞孵育时间。