看官好，我是江湖“万物可CAR”的CD3/CD28

以CAR-T为代表的“万物可CAR”技术乱战的江湖里面，不仅仅比拼的是靶点的精准性，还在于T细胞发挥疗效的核心：高分辨率的靶点、T细胞毒性的增强，这两个要素缺一不可。T细胞毒性的发挥与嵌合的共刺激信号分子的表现也密不可分，这一切的前提就不能离开T细胞的活化和增殖。

一般而言，双特异性抗体具有耐受良好（CRS相对较低）和通用性等优点，因此如何对双特异性抗体改造，在不损害现有优势的条件下并提高其疗效是双特异抗体开发的一个重点方向。目前，在开发的双特异抗体管线中，超过一半的双抗均是通过CD3靶点来激活T细胞，从而对肿瘤细胞进行杀伤进而达到治疗癌症的目的。

CD3分子分布于成熟T淋巴细胞表面，至少由γ、δ、ε、ζ、η5种多肽链组成，与T细胞抗原受体非共价连接。CD3单克隆抗体可诱导CD3多肽和TCR共帽形成（co-capping)，并诱导T淋巴细胞活化。TCR识别外来抗原与自身MHC分子形成的复合物，CD3对于信号的传递具有重要作用。由于拥有独特的生物学机理，双特异性抗体已经成为抗体药物研发领域的一个重要分支，也是当下制药行业最热门的研发和投资方向之一。根据相关信息统计，目前全球有超过180种双抗处于临床开发阶段，约260种双特异性抗体处于临床前开发阶段，其中，CD3是双抗药物研究的主要靶点[2]

CD28作为一种共刺激因子，具有两种最显著的功能：

（1）T细胞活化的辅助信号：抗CD28可加强PHA、ConA、抗CD2McAb、抗CD3McAb等增殖、活化的效应，增加IL-2、IL-3、TNF-α、IFN-β、GM-γ、GM-CSF等细胞因子产生，激活CTL细胞。此外，抗CD28McAb可诱导T细胞IL-13mRNA的表达；

（2）CD28的天然配体是B细胞活化抗原B7/BB1（CD80），CD28与CD80的结合是T-B细胞相互协作的主要方式，并刺激B细胞活化。

在外周血淋巴细胞，CD28+细胞占比达到54～86%，其中90%的 CD4+ T细胞和50%的 CD8+ T细胞表达CD28。CD28在CD28+ T细胞中表达与功能有一定的关系，CD8+CD28+ T细胞表现出MHC限制的细胞毒性功能，而CD8+CD28- 细胞可抑制抗体产生以及同种异体抗原所诱导的细胞增殖效应。此外，浆细胞瘤及部分活化的B淋巴细胞也可表达CD28。

值得一提的是，IL-2是γ受体细胞因子家族中第一个被鉴定的细胞因子，它最初是从活化的人类T细胞培养上清中发现的，是一种介导T细胞增殖的可溶性因子。IL-2也是FDA批准用于癌症治疗的第一种细胞因子。虽然在抗原刺激下主要由CD4+和CD8+T细胞分泌，但活化的树突状细胞（DC）、肥大细胞和NKT细胞也产生少量的IL-2。IL-2能刺激T细胞和NK细胞的增殖和活化、诱导B细胞免疫球蛋白合成和支持细胞毒性效应细胞分化，因此，在培养T细胞的时候，适量加入IL-2，会有不错的效果。

bsAB从20世纪80年代提出作为新兴人工合成抗体分子，可以同时特异性识别和结合两种及以上不同的抗原和表位。CD3、CD28作为T细胞激活的两个重要靶点，在体外联合使用CD3、CD28抗体刺激T细胞，可以模拟体内T细胞活化双信号作用。使用CD3/CD28Monoclonal antibody coupled magnetic beads可以提供T细胞激活与扩增所需的主要信号和协同刺激信号，利用CD3/CD28免疫Magnetic beads进行磁性细胞分离，CD3⁺T细胞得到有效分离和富集。CD3⁺T细胞在4.5μm左右的Magnetic beads条件下培养，与细胞大小完美匹配，模拟APC高效激活扩增T细胞。研究表明，CD3/CD28单抗偶联Magnetic beads可持续刺激T细胞，远远超出单用CD3/IL-2刺激倍数，并且能保留更多T细胞记忆表型，增加疗效时长。

总而言之，利用抗CD3的抗体提供第一信号，抗CD28抗体刺激提供共刺激信号，来使T细胞充分活化，这使得CD3/CD28Monoclonal antibody coupled magnetic beads逐渐成为目前市场上的主流选择。

总结：T细胞的活化是个非常复杂而精细的过程，现在仍然有一些关键通路并未研究透彻。随着CD3/CD28Monoclonal antibody coupled magnetic beads其作用机制的“红盖头”掀开，以及三抗药物的临床试验获批，我们相信未来CD3/CD28Monoclonal antibody coupled magnetic beads将在T细胞扩增以及“万物可CAR”的江湖里面继续扮演重要的角色，为肿瘤的“降服”提供更加强大的助力。