杂交瘤细胞无血清培养驯化

  1. 经过ELISA检测与细胞单克隆，所筛选的杂交瘤细胞扩增至含5%FBS血清KTM2或其它培养液的T75方瓶中静置培养，每天观察细胞活率及密度；

  2. 细胞经过一周三次换液的静置培养，细胞汇合度达到80%以上时，将方瓶内的培养液置换成含5%FBS的KD-Hybri培养液培养一代，目的是让细胞提前适应在KD-Hybri培养液里扩增；

  3. 随后将方瓶中约90%细胞转移至250ml摇瓶进行逐级降血清悬浮培养（培养体积为摇瓶容积的1/5）。补充含5%FBS新鲜的KTM2培养液于方瓶中继续培养剩余约10%细胞，用于细胞保种；

  4. 摇瓶逐级降血清的过程一般为5%FBS→2.5%FBS→无血清。从5%FBS降至2.5%FBS血清时，吸走25mL培养液及细胞，补充25mL不含血清的新鲜KD-Hybri培养液，使血清浓度降为原来的一半；

  5. 完成2.5%FBS培养后，将细胞全部转移至50ml离心管，1000rpm离心5min，再用新鲜KD-Hybri培养液重悬细胞，将细胞稀释至1.0×10^6个/ml，接种至250ml摇瓶中进行无血清培养；

  6. 完成驯化无血清培养后，选择对数生长期（1.5-3.5×10^6个/ml）的细胞进行传代，以密度为0.5×10^6个/ml接种，每隔三天传代一次。