酵母单/双杂交-酵母文库构建/文库筛选
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- 金开瑞
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- 2022-06-16 09:53:08
武汉金开瑞生物工程有限公司
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金开瑞拥有较齐全的cDNA文库，通过将已知基因作为诱饵，从选定的文库中筛选出与诱饵蛋白/诱饵序列存在特异相互作用的蛋白，材料用量少，获得全长的比例高。
技术应用
酵母双杂交系统因其具有灵敏性高，功能强大，适应范围广等特点，现已被广泛应用于多个研究领域。
1、将已知基因作为诱饵，在选定的cDNA文库中筛选与诱饵蛋白相互作用的蛋白；
2、一对已知蛋白相互作用研究；
3、蛋白相互作用结构域和位点的研究；
4、建立基因组蛋白连锁图。
5、酵母单杂交技术是Li在酵母双杂交的基础上发展而来的一种研究核酸-蛋白相互作用的工具，被广泛用于研究真核细胞内基因的表达调控，如鉴别DNA结合位点发现潜在的结合蛋白基因、分析DNA结合结构域信息等。
服务优势
采用Clontech SMART专利技术，以总RNA为模板，用SMART方法反转录成cDNA，材料用量少，获得全长的比例高。
服务流程
1、酵母单/双杂交文库构建
接收订单及样品——总RNA提取——mRNA纯化——反转录——双链cDNA合成及纯化——共转至酵母感受态细胞（改造的Y1H)——转化效率测定——文库效价测定——结果交付
2、酵母单杂交文库筛选
接收订单及样品——诱饵载体及诱饵菌株构建——自激活检测——克隆数计算——阳性克隆菌株鉴定——结果交付
3、酵母双杂交文库筛选
接收订单及样品——诱饵载体的构建——毒性检测——测定杂交效率——阳性克隆菌株鉴定——结果交付
接收订单及样品——总RNA提取——mRNA纯化——反转录——双链cDNA合成及纯化——共转至酵母感受态细胞（改造的Y1H)——转化效率测定——文库效价测定——结果交付
2、酵母单杂交文库筛选
接收订单及样品——诱饵载体及诱饵菌株构建——自激活检测——克隆数计算——阳性克隆菌株鉴定——结果交付
3、酵母双杂交文库筛选
接收订单及样品——诱饵载体的构建——毒性检测——测定杂交效率——阳性克隆菌株鉴定——结果交付
服务内容及说明
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服务项目
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客户提供
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最终交付
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文库构建
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组织/细胞
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滴度在1×108以上的酵母文库菌液；文库PCR鉴定结果图片（阳性率在80%左右）
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文库筛选
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promoter基因序列/质粒
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筛选过程中的全部原始图片；筛选获得所有相互作用的猎物蛋白的测序结果
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针对酵母单杂交实验结果，可作进一步验证：
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服务内容
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实验目的
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细分
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周期（工作日）
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EMSA
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验证启动子和蛋白互做
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探针合成及标记
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10
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EMSA实验
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20
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双萤光素酶检测
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验证启动子和蛋白互做
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载体构建
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10-15
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双萤光素酶检测
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25
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注：1. 双萤光素酶检测默认使用293T细胞，使用其他细胞视培养及转染难度议价；
2. 双萤光素酶检测启动子-转录因子验证默认1个转录因子 + 启动子序列WT和Mut各1个；microRNA靶基因验证默认1个microRNA + 靶序列WT和Mut各1个，超过以上组合数量请询价。
酵母双杂交
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服务项目
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客户提供
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最终交付
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文库构建
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组织/细胞
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滴度在1×108以上的酵母文库菌液；文库PCR鉴定结果图片（阳性率在90%左右）
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文库筛选
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蛋白序列/基因序列/质粒
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筛选过程中的全部原始图片；筛选获得所有相互作用的猎物蛋白的测序结果
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针对酵母双杂交实验结果，可作进一步验证：
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服务内容
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实验目的
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细分
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周期（工作日）
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Co-IP
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验证蛋白互做
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/
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20
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GST pull-down
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验证蛋白互做
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GST pull-down+WB/银染
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20
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