SulfoCy5 SE
- 1054-1 mg
- 北京富百科
- 北京市
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- 1mg/瓶
- 2450 元
- 2023-03-20 14:52:46
北京富百科生物技术有限公司
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产品介绍
SulfoCy5 SE
水溶性的SulfoCy5 SE=Cy5 NHS=Cy5琥珀酰亚胺酯 (琥珀酰亚胺酯SE(Succinimidyl esters) = N-羟基琥珀酰亚胺NHS(N-Hydroxy succinimide)
菁染料是性能优良的荧光标记染料，摩尔吸光系数在荧光染料中是最高的，其琥珀酰亚胺酯是最常用的脂肪氨基标记试剂，广泛用于蛋白、抗体、核酸及其他生物分子的标记和检测。通过改变次甲基链的长度, 可改变其荧光发射波长，每增加一个双键，按照Huoffman规则正好红移约100nm。
菁染料Cy3和Cy5已成为基因芯片的首选荧光标记物;另外,Cy5, Cy5.5和Cy7的吸收在近红外区背景非常低，是荧光强度最高、最稳定的长波长染料。特别适合于活体小动物体内成像代替放射性元素。
2. 菁染料琥珀酰亚胺酯（SulfoCy NHS）的标记
菁染料和生物分子的比例F/P=4～12之间荧光强度最高，F/P值过高荧光探针会自我淬灭并影响生物分子的生物活性，标记生物分子最好是用单琥珀酰亚胺酯，但是用双修饰的CyDye NHS并没有发现交联。CyDye NHS标记抗体在pH (8.5～9.4)时10分钟F/P可达5～6，而在pH 7.0几乎不反应。我们用不同比例的Cy3标记anti-glutathione-S-transferase (GST)多克隆抗体发现用1:1, 5:1, 10:1 和20:1标记时得到的F/P值分别是0.28:1, 1.16:1, 2.3:1 和4.6:1。
3. 操作步骤
3.1 水溶性SulfoCy5 NHS标记(D-ser2)-leucineenkephalin
1. Cy5 NHS 1.0 mg 溶解于400 μL 无水DMSO(无水DMSO推荐使用SigmaAldrich货号276855)后，加入到1mL 的玻璃瓶中盛有(D-ser2)-leucine-enkephalin acetate (YSGFLT, 0.75 mg) 的400 μL DMSO溶液。（Dye 和peptide 投料比是1:1）
2. 然后加入15 μL三乙胺，常温避光搅拌反应混合物过夜。
3. 用HPLC纯化蛋白，使用蛋白C18柱子(25 cm×10 mm)，每次上样注入2×400 μL，30分钟梯度洗脱从0.1% TFA水溶液到MeCN∶H2O（0.1% TFA）=70∶30，流速4mL /min。（对不同的蛋白选择不同的合适HPLC梯度流动相）
4. 收集适当的色带峰，标记多肽的保留时间比未标记的多肽长。
5. 产品冷冻干燥成粉末或在水溶液中，-20℃避光储存；必要时可用质谱表征。
6．CyDye标记的蛋白稳定性取决于蛋白本身。例如标记的IgG在4 ℃可避光保存2月；更长期的保存需加入等体积的甘油-20 ℃避光保存。
F/P计算：
SulfoCy5 在650 nm 的摩尔吸光系数为250 000 M-1cm-1，所用蛋白在280 nm处的摩尔吸光系数为170 000 M-1cm-1；Cy5在280nm处的吸收是650nm处的5%。按以下公式计算F/P值。
特别提醒：
1) 本公司所有产品仅限于专业人员用于生命科学研究，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅。
2) 本公司所有产品必须由合格专业技术人员操作同时佩戴口罩/手套/实验服并遵守生物实验室安全操作规程！
产品参数
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Name
|
SulfoCy5 SE
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CAT#
|
1054-1 mg
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CAS#
|
N/A
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Storage#
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−20°C干燥避光保存
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Shelf Life#
|
12months
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Ex(nm)#
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646
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Em(nm)#
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664
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MW#
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791.99
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Solvent#
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Water or DMSO
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