Western blot 免疫印迹(WB)
- CTCC-Western blot 免疫印迹(WB)
- CTCC
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- 2022-07-29 14:33:03
无锡菩禾生物医药技术有限公司
免疫印迹immunoblotting
免疫印迹immunoblotting又称蛋白质印迹western blot,它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。Western blot是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于western blot具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性,现已成为蛋白分析的一种常规技术。Western blot常用于鉴定某种蛋白,并能对蛋白进行定性和半定量分析。
实验步骤
需新鲜或正确保存的蛋白样品或者蛋白粗提液,阳性对照样品(如果有), 组织样品不少于50mg;细胞不少于5×106个;总蛋白浓度不低于 2μg/μl(至少50μl)。
服务基本流程
1. 蛋白提取和定量(如果提供蛋白样品,则直接电泳预实验检测抗体特异性);
2. SDS-PAGE 10-15% 变性聚丙*酰胺凝胶电泳;
3. 转膜(PVDF膜);
4. 封闭 (5%脱脂奶粉);
5. 一抗孵育(其中内参基因为Tubulin或HistoneH3.1);
6. 二抗孵育(如果由于材料降解或一抗造成实验无法继续,则收相关预实验费用);
7. 显色(ECL);
8. 曝光、洗片、灰度分析;
结果展示:
实验周期及交付标准
1.实验周期: 1-2周
2.交付标准: 1、曝光结果(胶片和扫描图)及灰度值;
2、详细实验报告,含所需试剂耗材、仪器设备及操作过程等。