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荧光素酶互补成像技术 LCI
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  • 2024-01-15 10:53:14

安徽中科圣安生物技术有限公司

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▲ 荧光素酶互补成像技术(LCI)原理示意图

 

原理简介

  萤火虫荧光素酶片段互补成像技术(LCI)是近年来形成的研究蛋白互作的新技术,把2个目标蛋白分别连接于萤火虫荧光素酶的C端 (CLuc:398–550 aa)和N端(NLuc:2–416aa)。如果2个蛋白互作,N段和C端接近形成有活性的荧光素酶,荧光素酶分解萤光素底物并产生荧光。
  将LCI技术与烟草瞬时表达技术相结合来研究植物蛋白的相互作用。该技术具有很多优势:1、可以实现活体细胞内实时、定量分析;2、不受植物自发荧光的干扰;3、不需要裂解细胞提取蛋白质,可以很好的反映植物生理条件下蛋白的互作状态。

 

▲ 荧光素酶互补成像(LCI)实验流程图

 

实验流程

  荧光素酶互补成像(LCI)实验流程图

  ①植物表达载体构建(融合蛋白):目的基因克隆或目的基因合成;限制性内切酶酶切骨架载体并纯化;目的基因插入骨架载体;转化大肠杆菌,筛选阳性克隆并测序鉴定;

  ②转化农杆菌:将目的载体转化到农杆菌菌株内,例如:GV3101;
  ③注射烟草:将含有CLuc与NLuc的农杆菌菌液按照比例混匀,共同注射本氏烟叶片;
  ④定量、定性分析;
  ⑤检测目的蛋白的表达;
  ⑥分析结果并完成交付。

 

 

结果展示

  技术服务范畴:验证两个已知蛋白质间的相互作用
  技术服务优势:
  ①团队经验丰富;
  ②提供原始图片,保证数据真实可靠;
  ③该技术得到的蛋白互作关系符合体内实际情况,结果可信度高;
  ④可定性、定量分析蛋白互作关系。

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