Catalog No：PH0324

Size：50T | 100T

有效期：12个月

存储 冰袋运输，有效期12个月，核/浆蛋白抽提试剂 4℃保存，PMSF 于-20 ℃保存。

产品简介

本试剂盒提供了一种简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提核蛋白的方法。整个过程只需约 60 分钟 就可以将核蛋白和浆蛋白从细胞中分离出来。得到的蛋白可以用于 Western blot 等实验。本试剂盒通过浆蛋白 抽提试剂使细胞膨胀破裂，释放出胞浆蛋白，再通过离心得到细胞核。然后通过核蛋白抽提试剂抽提得到细 胞核蛋白。本试剂盒可以抽提 50/100 个样品（每个样品约 2×10⁶个 Hela 细胞，40mg）。

操作步骤

裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。

一、对于体外培养细胞：

1．根据用量取适当的浆蛋白抽提试剂和核蛋白抽提试剂加入 PMSF，使 PMSF 的最终浓度为 1mM。PMSF 需现用现加，若目标蛋白含有丰富的半胱氨酸，可以在两种蛋白抽提液中加入 DTT 至终浓度 0.5mM。

2．对于贴壁细胞，去除培养液，用 PBS 洗一遍，用细胞刮刀收集细胞，或用 EDTA 消化后吹打下细胞（最 好不用胰酶硝化，以免胰酶消化目的蛋白）。500 g 离心 2～3 分钟收集细胞，吸尽上清留下沉淀备用。

3．对于悬浮细胞：用 PBS 洗一遍，500 g 离心 2～3 分钟收集细胞，吸尽上清，留下细胞沉淀备用。

4．每 20ul 细胞沉淀加入 200ul 浆蛋白抽提试剂（2×106 个细胞沉淀约 20ul 或 40mg）。

5．用移液器吹打或高速涡旋 15 秒（可适当延长），必须使细胞沉淀完全分散开成单细胞悬液。细胞沉淀分散 不完全会导致蛋白产量降低。

6．冰浴 10 分钟。

7．最高转速剧烈涡旋 10 秒，4℃ 12000～16000g 离心 10 分钟。

8．上清即为抽提得到的细胞浆蛋白，立即吸取上清至预冷的样品管中备用，进行后续的 PAGE、Western 等 实验，但蛋白浓度较低，可根据需要进行相应浓缩。

9．沉淀即为细胞核，要完全吸尽残余的上清（避免细胞浆蛋白的污染），加入 50-100ul 核蛋白抽提试剂。

10．用移液器吹打或高速涡旋 15 秒（可适当延长）至沉淀完全分散，冰浴 10 分钟。

11．最高转速剧烈涡旋 10 秒，4℃12000～16000g 离心 10 分钟。

12．立即吸取上清至预冷的样品管中，此即为抽提得到的细胞核蛋白。可进行后续实验或-70℃冻存。

对于组织样品： 把组织称重后，尽可能切成非常细小的碎片，按每 50mg 组织加入 200ul-500ul PBS，用匀浆器冰上匀浆 制成细胞悬液，500 g 离心 2～3 分钟收集细胞，吸尽上清，收集沉淀。加入 200ul 浆蛋白抽提试剂后接上述步骤 5。

注意事项

1．裂解得到的蛋白样品，由于含有较高浓度的去垢剂干扰，不能用 Bradford 法测定蛋白浓度，可以选用本公 司生产的 BCA 蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。

2．对于组织样品，本试剂盒适用于新鲜组织，对冻存组织抽提效果较差。

3．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。