产品概述

核蛋白和浆蛋白提取试剂盒（Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit）提供了一种比较简单、方便的从细胞或组织中提取细胞核蛋白和浆蛋白的方法 , 约90min就可以完成细胞核蛋白与浆蛋白的分离。制备的核蛋白和浆蛋白能保持天然活性，且纯度较高 , 可用于Western blot、co-IP、 EMSA（也称gel shift）、footprinting进一步的转录因子活性分析、酶活性测定等后续蛋白质研究。 

本试剂盒是通过细胞浆蛋白提取试剂A和B，在低渗透压条件下，使细胞充分膨胀，然后破坏细胞膜，释放出细胞浆蛋白，然后通过离心得到细胞核沉淀。最后通过高盐的细胞核蛋白提取试剂C提取得到细胞核蛋白。

包装信息

 

操作流程

1. 室温溶解试剂盒中的三种试剂，溶解后立即放置在冰上。取适量的细胞浆蛋白抽提试剂A和细胞核蛋白抽提试剂C备用，在使用前数分钟内加入PMSF和DTT，使其终浓度均为1mM。

2. 贴壁细胞：取培养细胞2 x10⁶-2x10⁷个,弃培养液，用预冷的1x PBS洗2-3次，离心10min（1000rpm），弃上清 , 留下细胞沉淀备用。

3. 悬浮细胞：用预冷的1xPBS洗一遍，1000rpm , 离心10min，弃上清，留下细胞沉淀备用。

4. 每20ul沉淀加入200μl添加了PMSF和DTT的细胞浆蛋白抽提试剂A。

5. 最高速剧烈涡旋5s，把细胞沉淀完全悬浮并分散开 , 冰浴10-15min。若没有完全分散开，可适当延长涡旋时间。

6. 加入10μl细胞浆蛋白抽提试剂B，最高速剧烈涡旋5s，冰浴1min。

7. 最高速剧烈涡旋5s，12000rpm , 4 ℃离心5min  , 取上清即为细胞浆蛋白。

8. 对于沉淀，完全吸尽残余的上清，加入50ul添加了PMSF和DTT的细胞核蛋白抽提试剂C。

9. 最高速剧烈涡旋15-30s后放回冰浴中，每隔1-2min再涡旋15-30s，共30min。

10. 12000rpm， 4℃离心10min , 取上清即为细胞核蛋白。

11. 组织 :

（1）取60mg组织 , 尽可能切成非常细小的碎片 , 加入200μl细胞浆蛋白抽提试剂A与10μl细胞浆蛋白抽提试剂B , 并加入PMSF和DTT至其终浓度为1mM , 在玻璃匀浆器内充分匀浆 , 匀浆需在冰浴或4℃进行。

（2）匀浆后把匀浆液转移至预冷的离心管中，冰浴放置15min。

（3）12000rpm，4 ℃离心5min 。把上清转移至一预冷的离心管中，即为抽提到的部分细胞浆蛋白。

（4）对于沉淀，继续按照步骤4-10开始操作 , 即得到细胞浆蛋白和细胞核蛋白 , 其中细胞浆蛋白可以和步骤11中抽 提到的细胞浆蛋白合并使用。

产品图片：