2003年，Watanabe等科学家在用Affymetrix array方法进行基因筛选时，在活化的Th1细胞（1型辅助性T细胞）上发现了一个不知名的序列片段，将其命名为BTLA（B and Tlymphocyte attenuator，CD272）。

2005年，Sedy和Murphy等科学家通过研究确定疱疹病毒入侵介质（HVEM，herpesvirus entry mediator，TNFRSF14，CD270）是BTLA的特异性配体，同时解释了BTLA和HVEM的相互作用机制。

BTLA（B/T淋巴细胞衰减因子）属于CD28受体家族成员，是一种重要的共抑制受体，可抑制激活信号转导。其蛋白结构和功能与PD-1和CTLA-4具有相似性，包括细胞外单个IgV样结构域、跨膜区和胞质区。HVEM属于TNF受体家族成员，是一种跨膜蛋白，在结构上有多个细胞外富含半胱氨酸结构域(CRD)。

HVEM和BTLA之间的相互作用是最早发现的Ig结构与TNFR家族之间的连接。HVEM与BTLA结合会抑制T细胞和B细胞活化、增殖以及细胞因子生成。^[1]

BTLA/HVEM通路。BTLA是一种共抑制受体，通过招募Shp1和Shp2来抑制T淋巴细胞中的TCR信号转导。其配体HVEM也可以与其他分子如LIGHT或淋巴毒素-α（LTα）结合，这会触发共刺激信号（绿色箭头），或者在不同的结合位点上与CD160另一个共抑制受体（红色箭头）结合。HVEM还能够与Herpes Simplex Virus (HSV)的糖蛋白D进行结合。^[2]

在黑色素瘤中，肿瘤抗原特异性CD8+ T细胞表达BTLA和PD-1并发挥功能，可能促进了HVEM阳性肿瘤的免疫逃逸。阻断这些抑制性受体的单克隆抗体可逆转这种抑制功能。B-CLL细胞高表达HVEM、BTLA、PD-1和CD160。这些共抑制受体的共表达可能参与了CLL的发病。同一细胞上HVEM/BTLA顺式复合物的存在会阻断与T细胞上表达的其他HVEM配体的反式相互作用，其对T细胞应答的功能结果需要评估。^[3]

 

药物进展

BTLA-HVEM作为潜力靶点，目前全球已有6款在研药物进入临床实验阶段，亦有众多企业开始布局该赛道。

为满足BTLA、HVEM相关药物研发需求，百奥动物基于BTLA、HVEM相关机制，分别开发出一系列B-hBTLA mice、B-hPD-1/hBTLA mice、B-hBTLA/hHVEM mice等动物&细胞模型，可以广泛应用于药物活性测定及筛选等，大大加速新药研发进度。部分数据展示如下：

B-hBTLA mice

B-hBTLA小鼠的T细胞结合抗人BTLA抗体

B-hBTLA小鼠脾细胞的FACS分析。从纯合B-hBTLA小鼠中分离脾细胞。脾细胞流式细胞术检测抗人BTLA Ab1与T细胞的结合情况。单个活细胞对CD45群体进行门控，并用于进一步分析。与同型对照相比，纯合B-hBTLA小鼠的T细胞与hBTLA Ab1(内部合成)结合良好。

抗人BTLA抗体的体内疗效

抗人BTLA抗体在B-hBTLA小鼠中的抗肿瘤活性。(A)抗人BTLA抗体抑制B-hBTLA小鼠的MC38肿瘤生长。将小鼠结肠癌hHVEM MC38细胞皮下接种于纯合B-hBTLA小鼠(雌性，6~7周龄，n=5)。当肿瘤体积达到约100 mm³时，将小鼠分组，此时对小鼠进行两种抗人BTLA抗体治疗，剂量和方案见图A。(B)治疗期间的体重变化。如图A所示，抗人BTLA抗体能有效控制B-hBTLA小鼠的肿瘤生长，表明B-hBTLA小鼠为体内评估抗人BTLA抗体提供了一个强大的临床前模型。值表示为平均值±SEM。（抗体内部合成）

抗人BTLA抗体的体内疗效

抗人BTLA抗体在B-hBTLA小鼠中的抗肿瘤活性。(A)抗人BTLA抗体抑制B-hBTLA小鼠的MC38肿瘤生长。小鼠结肠癌MC38细胞皮下植入纯合B-hBTLA小鼠(雌性，6-7周龄，n=5)。当肿瘤体积达到约100 mm³时，将小鼠分组，此时对小鼠进行两种抗人BTLA抗体治疗，剂量和方案见图A。(B)治疗期间的体重变化。如图A所示，抗人BTLA抗体能有效控制B-hBTLA小鼠的肿瘤生长，表明B-hBTLA小鼠为体内评估抗人BTLA抗体提供了一个强大的临床前模型。值表示为平均值±SEM。（抗体内部合成）

抗人BTLA抗体的体内疗效

抗人BTLA抗体在B-hBTLA小鼠中的抗肿瘤活性。

将B-hHVEM MC38细胞以1×10⁶个/0.1 mL接种于人源化雌性B-hBTLA小鼠的右侧皮下组织，待肿瘤生长至118 mm³时，按肿瘤体积随机分为5组(每组8只)。各组均腹腔注射给药，每周2次，连续7次，末次给药后第4天结束实验。与KLH阴性对照组小鼠的体重相比，各给药组小鼠的体重在给药21天后没有明显变化(图12)，说明实验动物对样品具有良好的耐受性。与KLH阴性对照组相比，其他给药组的TGITV%分别为33.7%、56.4%和48.0%，P值分别为0.175、0.046和0.056(图11)，说明试验药物hu18在3 mg/kg剂量水平下对肿瘤生长有一定的抑制作用。此数据来自客户专利US20210246209A1。

 

B-hPD-1/hBTLA mice

蛋白表达分析

流式细胞术分析B-hPD-1/hBTLA纯合小鼠种属特异性BTLA表达。在体内经抗CD3ε刺激的WT和纯合B-hPD-1/hBTLA 小鼠中采集脾细胞，用种特异性抗BTLA抗体流式细胞术进行分析。小鼠BTLA在WT小鼠中检测到。人BTLA仅在纯合B-hPD-1/hBTLA中检测到，而在WT小鼠中检测不到。

蛋白表达分析

流式细胞术分析B-hPD-1/hBTLA纯合小鼠种属特异性PD-1表达。在体内经抗CD3ε刺激的WT和纯合B-hPD-1/hBTLA 小鼠中采集脾细胞，用种特异性抗PD-1抗体流式细胞术进行分析。小鼠PD-1在WT小鼠中检测到。人PD-1仅在纯合B-hPD-1/hBTLA中检测到，而在WT小鼠中检测不到。

 

B-hBTLA/hHVEM mice

肿瘤生长曲线及体重变化

B-hHVEM MC38细胞皮下同种移植物肿瘤的生长。将B-hHVEM MC38细胞(1×10⁶)和野生型MC38细胞(5×10⁵)皮下植入纯合B-hBTLA/hHVEM小鼠(雌性，6周龄，n=7)。每周2次测量肿瘤体积和体重。(A)平均肿瘤体积±SEM。(B)体重(Mean±SEM)。体积以mm³表示，公式为:V=0.5×长径×短径²。如A图所示，B-hHVEM MC38细胞在体内能够形成肿瘤，可用于药效研究。

单只小鼠的肿瘤生长曲线

B-hHVEM MC38肿瘤细胞的生长。将B-hHVEM MC38细胞(1×106)和野生型MC38细胞(5×105)皮下植入纯合B-hBTLA/hHVEM小鼠(雌性，6周龄，n=7)。如图所示，B-hHVEM MC38细胞能够在体内形成肿瘤，并可用于药效研究。

参考资料：

1. Yu X, Zheng Y, Mao R, et al. BTLA/HVEM signaling: milestones in research and role in chronic hepatitis B virus infection[J]. Frontiers in immunology, 2019, 10: 617.

2. BTLA-HVEM Couple in Health and Diseases:Insights for Immunotherapy in Lung Cancer. Front Oncol. 2021; 11: 682007.

3. Curr Opin Pharmacol. 2012 Aug;12(4):478-85.