一、产品介绍：
Exosupur® sEV纯化试剂盒，是基于分子尺寸排阻色谱SEC原理进行小细胞外囊泡sEV的分离纯化，适用于血浆、血清等成分复杂生物样本，以及微量血浆/血清(200µl)复杂生物样本的外泌体分离纯化，具有纯度高、得率好、方便快捷等优势，是复杂样本外泌体组学、功能研究的好助手。
针对1ml的常量血浆/血清到0.2ml微量血浆/血清等成分复杂生物样本sEV分离提供系统性解决方案。
保存条件：2-8℃保存
二、产品规格：
1）Exosupur®sEV分离kit-1ml血浆/清排阻柱
规格：ES9P11e & ES9P14e
1）1ml*1pcs，上样1ml*5次重复=5ml，5个样本
2）1ml*4pcs，上样1ml*4根*5次重复=20ml，20个样本
2）Exosupur®sEV分离kit-微量血浆/清排阻柱
规格：ES9P021e & ES9P024e
1）0.2ml*1pcs，上样0.2ml*5次重复=1ml，5个微量样本
2）0.2ml*4pcs，上样0.2ml*4根*5次重复=4ml，20个微量样本
三、产品原理：
国际细胞外囊泡协会（ISEV）建议的最小实验要求（MISEV2023）中，关于基于商业化试剂盒分离EV的建议如下：
分子尺寸排阻色谱法SEC原理：生物流体样品加入含有具有固定孔隙的SEC填充材料的排阻柱中，粒径较小的分子如蛋白、脂类等可进入填充材料的固定孔隙，而较大粒径的分子或颗粒不能进入孔隙只能进入填充材料间隙。因此加入缓冲液的作用下，较大粒径的囊泡因只能进入材料间隙流速快在前面的馏分中被洗脱，而小分子杂质则需要更长的洗脱时间才能流出，从而实现EV的分离。
分子尺寸排阻色谱法SEC在诸多分离方法中综合性能较高，并且使用频次仅次于超离，在EVs专刊JEV中的研究占比日益提高。
Exosupur®血浆/血清 sEV纯化试剂盒即是基于SEC方法开发的，针对血浆/血清等成分复杂体液样本的sEV外泌体专用分离纯化试剂盒。
四、产品应用：
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1ml和微量排阻柱分别适用于常量或微量血浆/血清等复杂生物样本；
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分离的复杂生物样本来源sEV纯度更高，杂质干扰更少，适用于高通量测序、质谱等组学研究，以及下游的PCR、WB、WLISA验证等表达定量研究，定量更准确；
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通过本试剂盒分离复杂生物样本来源sEV，方法温和简单，不影响外泌体性质和活性、不引入聚集和其他杂质等影响，可用于细胞、动物的功能机制研究实验；
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复杂样本sEV纯化相关的方法学开发中，本试剂盒可作为对照方法使用。
五、产品优势：
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操作简便：无需特殊设备，柱平衡、上样、外泌体收集、外泌体浓缩4步操作，从上样到分离完成仅需30min；
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性能优越：对于常量血浆样本Exosupur®1ml血浆/清排阻柱可回收最高达95%的荧光脂质体，杂蛋白去除率高达99.5%；微量血浆/清排阻柱可回收高达94%纳米颗粒，杂蛋白去除率平均为98%；
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稳定性高：只回收固定尺寸范围的外泌体，产物粒径范围窄；实验受外界因素波动的影响比较小；不引入其他的物理(如超离的超高速离心力)和化学因素（如沉淀法的PEG颗粒），可以保持完整的外泌体形态和功能；
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性价比高：通过对排阻柱进行清洗再生，可重复使用5次，即单根排阻柱可处理5个样本；
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质量可靠：Exosupur®系列sEV纯化试剂盒高效便捷，已辅助客户发文70篇+，不乏IF 10以上的高质量文献，经受了行业专家的检验，获得北京市新技术新产品认定。
六、性能数据
Exosupur®分离的血浆或微量血浆小细胞外囊泡sEV 经TEM电镜、WB和nanoFCM粒径表征质量可靠。
Exosupur®1ml血浆/清排阻柱对于血浆样本可回收高达95%的荧光脂质体，杂蛋白去除率高达99.5%；微量血浆/清排阻柱可回收高达94%纳米颗粒，杂蛋白去除率平均为98%；
下左图为1ml血浆/清排阻柱(ES9P14e、ES9P11e)分离1mL血浆sEV效果，下右图为微量血浆/清排阻柱(ES9P021e、ES9P024e)分离0.2mL微量血浆sEV的效果。
下第2排图片，Western Blot中可以看出血浆中主要的miRNA结合蛋白更少，杂蛋白更少。高纯度外泌体更有利于RNA组学、蛋白组学及细胞功能学和在体实验研究。
通过分离的血浆sEV particle数与蛋白含量比值评估外泌体纯度，与其他试剂盒或经典超离UC相比，Exosupur®分离的外泌体纯度更高，杂蛋白含量更低。
数据来自于J Transl Med. 2021 Mar 12;19(1):104.
对于低表达量的长RNA，与其他试剂盒或经典超离UC相比， Exosupur®分离的血浆sEV能够得到更高丰度的长链RNA，更有利于mRNA + LncRNA研究。
数据来自于J Transl Med. 2021 Mar 12;19(1):104.
对于miRNA，与其他试剂盒或经典超离UC相比，由于Exosupur®富集的外泌体得率更高、纯度更高，使得富集于sEV的miRNA定量值更高，而非富集miRNA定量值非常低，能够更准确分析sEV来源miRNA。
数据来自于J Transl Med. 2021 Mar 12;19(1):104.
Protein K和RNase A双酶消化Exosupur®和其他试剂盒得到的EVs，进一步证实了Exosupur®得到的sEV RNA更多的是来源于囊泡，而囊泡外的游离RNA检测值更低。
Exosupur®分离的外泌体进行蛋白质组研究时，与经典的超离UC相比，可检测到更丰富的囊泡特异的标志物蛋白，表明外泌体纯度高，有利于检测到更多的外泌体来源的蛋白；提升检测蛋白数量，有利于不同样本之间的差异分析；与已发表文章、数据库具有较多overlap，表明数据可靠，能够准确的对外泌体蛋白进行研究。
对比不同的SEC分离方法：经过Exosupur®试剂盒收集的馏分，具有最高的荧光强度（A)和最低的蛋白质浓度（B和C），表明Exosupur®具有最有效的EVs回收率和最低的游离蛋白质污染。
七、常见问题FAQ
Q：该试剂盒分离外泌体需要自备的内容有哪些？
A：1）无菌PBS溶液(须用0.22μm滤膜过滤，建议新鲜配置或采购已过膜的PBS，4°C冰箱保存的PBS溶液需先平衡至室温)；
2）20%无水乙醇(须超声条件脱气20min或配置好后静置过夜)；
3）超滤管(截留分子量100kD)；
4）收集管(1.5mL EP管和15mL离心管)；
5）样品(上样前需平衡到室温)。
Q：如果是0.5ml左右的血浆样本应该用哪一款试剂盒？
A：直接稀释到1ml上样到Exosupur® ES9P11e/ES9P14e 1ml血浆排阻柱
Q：Exosupur® 微量血浆/清排阻柱的上样0.2ml指的是原始血浆/血清吗？
A：指的是经过低速离心和过0.45 μm滤膜处理后的样本，0.2ml。请注意滤膜过滤会损失约100 μl。如果只用0.2ml血浆进行滤膜过滤建议客户再用约100 μl PBS进行二次过膜润洗。
Q：样本收集完了，颜色还在中间，是否有问题？
A：按照操作说明来做，就没问题，一般是颜色滞后，因为颜色都是小分子成分，会靠后出来，外泌体会先流出，故不能以颜色作为外泌体收集的判断。
Q：用完了是直接用封闭液冲洗，还是2倍柱体积PBS冲了再用1倍柱体积封闭液冲？
A：如果本次接着用就不用封闭液清洗；如果本次不用了，需保存起来下次用，那么本次就用PBS冲洗后再封闭液冲洗。
Q：分离后的外泌体如何保存？
A：外泌体保存问题跟分离方法无关，是由其本身特性决定的，如果条件允许最好使用新鲜的外泌体进行实验，冻存的外泌体容易产生团聚并出现沉淀。实际研究中，外泌体功能实验往往需要大量的外泌体不得不分批提取保存时可-80℃保存；但做biomarker研究时，如RNA组学等，提取外泌体后需尽快完成RNA提取等后续实验。
