一.DNA克隆简介

DNA克隆是基因工程研究中基本的操作之一。简单地讲，就是将外源基因与克隆载体进行体外连接，然后再转化到宿主菌中进行克隆、筛选，以此获得质粒重组体。

二.服务要求

1. 提供外源DNA的来源及背景资料。DNA来源包括：PCR扩增产物，RT-PCR扩增产物，从其他质粒上酶切得到的DNA片段等。

2. 如DNA为PCR产物，请提供DNA片段的电泳照片，并请标明Marker及其浓度。  

3. 注明克隆使用的酶切位点。

4. 如果为商品化载体，请提供生产厂家及标准名称，如果所提供载体是您构建的，请注明多克隆位点、抗性、分子量等资料。

5. 实验中使用氨苄、青霉素、卡那霉素、四环素以外的抗生素时，抗生素需您提供。

6. 您自己提供的引物如果为干品，请标明具体的OD数，如果为液体状态，请标明具体浓度。

7. 可用甘油菌和穿刺菌的形式邮寄菌体（尽量同时提供相应质粒），如果提供质粒则质粒的量尽量在4μg以上；如果提供的是PCR产物，则PCR产物量尽量在5μg以上（尽量附有电泳照片）。

三.操作程序

1. 通过代理商或直接和公司联系，同时提供详细的背景资料，实验要求等。代理商或公司经过研讨后将和您取得联系，协商确定实验方案，并告知您具体的服务价格，我们将签订合同，在收到您试验材料后，立即开始实验。

2. 如果您需要我们进行PCR扩增时，我们会采用高保真DNA聚合酶进行PCR反应，但不承诺测序结果与参考序列完全一致。

3. 如果克隆后的质粒需要测序反应，请将标准参考序列的电子版资料提供给我们。

4. 在完成DNA克隆和测序等工作后，我们将为您提供一套完整的实验结果，其中包括：实验操作说明、引物、克隆构建的质粒及含该质粒的菌体（穿刺菌）、测序结果碱基序列图和测序彩色峰形图。

5. 一般情况下普通载体的克隆需10天左右时间。

四.收费标准

1. 普通载体（如pUC系列、pBluescript ll系列、T载体系列、pGEM系列等）与其他特殊载体（如pET系列、pGEX系列、pLNCX 系列、pQE系列、pBR系列等）在克隆时难易程度相差很大，不同的DNA片段的克隆情况也各不相同，因此DNA片段的克隆服务收费标准不一样。一般来说，单就克隆操作这一步骤而言的收费标准在600～1500之间，具体情况请询价。  

2. 多表达框、多拷贝数质粒构建过程相对复杂，具体收费标准请与公司基因工程师直接谈。

五.克隆服务的种类

1、PCR产物的TA克隆。

2、PCR产物克隆到非T载体。

3、注明克隆使用的酶切位点以及是否需要平端连接等。

4、各种载体中元件的修改。

5、原核、真核表达载体的构建。