ChIP(Chromatin immunoprecipitation)染色质免疫共沉淀
染色质免疫共沉淀技术主要应用于验证及探寻体内环境中，蛋白质和DNA的直接相互作用，旨在探索特定蛋白质在DNA上的特定结合序列，常在研究转录调控以及组蛋白修饰中被应用到。
实验过程大致为:交联解交联超声打碎兔疫沉淀洗涤-DNA纯化-PCR检测。

实验步骤
1.样品准备:培养细胞(若样品为组织,可先培养原代细胞);固定,或者直接活细胞送样。
2.细胞固定:此步骤目的为将结合在DNA上的蛋白用共价形式交联在所结合的位点上,避免在之后的操作步骤中脱离丢失。直接将甲醛加入细胞培养液,摇晃固定10分钟后,迅速加入2.5M甘氨酸解交联5分钟, PBS洗涤,刮下细胞。
3.超声打碎:此步骤目的为将长链的DNA打碎成200-1000bp的DNA片段。使用设备是超声水浴锅, EP管在冰水混合物中超声，超声后细胞悬液变得澄清透明。离心取上清。
4.免疫沉淀:此步骤是加入特异性抗体和对照lgG , 和结合抗体的磁珠(或proteinAG)。经稀释后,超声产物分成两份, 分别加入特异性抗体和对照lgG ,轮转过夜,第=二天加入磁珠轮转4小时。
5.洗涤:此步骤是减少非特异性结合。分别用稀释缓冲液、低盐溶液、高盐溶液、氯化锂溶液以及TE缓)冲液洗涤共7次。用洗脱缓)冲液在65*C洗脱过夜。
6.DNA纯化:将洗脱的产物用DNA纯化试剂盒纯化,得到50ul纯化产物,用于检测ChIP结果。

适用研究
1.筛选调控蛋白在基因组上的结合靶点:针对转录因子、DNARNA聚合酶、转录复合物等调控因子蛋白进行特异性的富集，分离纯化与之结合的靶DNA片段并测序，分析筛选到准确有效的靶位点、靶基因数据
2.揭示差异化表观遗传变异的原理:通过对不同表型组织内组蛋白、转录因子蛋白及其他结合蛋白进行染色质免疫共析，即可准确揭示差异化表观变异原理;
3.研究表观遗传变异疾病:借助染色质免疫共沉淀测序技术结合生物信息分析揭示由蛋白与DNA相互作用变异而引起的疾病的原理，明确表观遗传修饰在癌症等表观遗传变异疾病的发生发展过程中的具体作用机制。


结果展示








实验周期及交付标准
1.实验周期: 1-2周
2.交付标准:
①SDS-PAGE电泳结果;
②结果分析
③实验中的阳性对照和阴性对照结果;
④实验报告