产品介绍：

DL-Cyto-Fix & Perm Kit主要应用于细胞内细胞因子或其他细胞质分子染色，可固定并透化细胞，进而对细胞内蛋白质进行染色。C-Perm/Wash Buffer经过反复优化，可最大程度地减少非特异性染色并最大化特异性荧光信号强度。

产品信息：

试剂配制：

工作浓度C-Perm/Wash Buffer（1X）：将1体积C-Perm/Wash Buffer (10X)加入9体积的去离子水，如将1ml C-Perm/Wash Buffer (10X) 加入9ml的去离子水，配制成10ml的1X C-Perm/Wash Buffer。1X C-Perm/Wash Buffer可保存在4℃并于一周内使用。

使用说明：

请详细阅读使用说明后再开始相关实验。

细胞刺激：根据所使用细胞和所需检测的分子特性，预先处理细胞。如所检测胞内分子为分泌型分子，需提前使用高尔基阻断试剂阻断检测分子的分泌从而将所测分子滞留在细胞内以便后续检测。

表面染色（可选）：收集细胞后，每管加入50ul表面染色缓冲液和适量体积的表面抗体，充分重悬细胞，4℃，避光孵育30 min后，加入500 ul表面染色缓冲液，300g×5min，4℃离心，弃去上清液；

向每管细胞中加入200ul Fix Buffer (1X)，充分重悬细胞，室温避光孵育15分钟；

注：建议细胞密度不高于10^7/ml；如细胞量多，可根据细胞量等比增加所使用Fix Buffer的量。

向每管细胞中加入500ul 1X C-Perm/Wash Buffer；

600g×5min离心，4 ℃，弃去上清液；

每管加入100ul 1X C-Perm/Wash Buffer和适量体积的胞内抗体，充分重悬细胞；

2-8°C避光孵育1h以上或过夜；

向每管细胞中添加500ul 1X C-Perm/Wash Buffer，洗去抗体；

600g×5min离心，4 ℃，弃去上清液；

将细胞重悬于300ul-500ul 1X C-Perm/Wash Buffer进行上机分析。

注：在室温下保存时，样品应在2小时内进行上机分析；在2-8°C下保存时，应在24小时内分析样品

常见问题及提示：

C-Perm/Wash Buffer (10X)的颜色因批次而异，并可能包含可见的沉淀；这不会影响产品的性能。

用户需根据不同细胞的要求在胞内染色之前预处理细胞。

一些试剂包含甲醛和叠氮化钠，请穿戴实验防护服、手套、口罩等必要的防护装备。

大部分商用抗体都能与本产品兼容。但某些抗原决定簇对固定剂敏感，需要根据经验优化固定时间。