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m6A甲基化测序(MeRIP-seq)
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  • 2022-12-01 10:19:36

合肥麟美生物科技有限公司

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m6A(N6-methyladenosine,6-甲基腺嘌呤)是真核生物mRNA中常见的一种转录后修饰。m6A主要富集在mRNA的启动子区、终止密码子区附近。作为一种可逆化修饰,RNA既可以在甲基化转移酶的作用下发生m6A甲基化修饰,又可以在FTO、ALKBH5等酶的作用下发生去甲基化修饰。m6A甲基化修饰被证明是可逆的,由甲基化转移酶 (Writers)、去甲基化酶 (Erasers)和甲基化阅读蛋白(Readers)等共同参与。

已知mRNA 5’ UTR处的甲基化修饰,作用包括维持mRNA稳定性、mRNA前体剪切、多腺苷酸化、mRNA运输与翻译起始等。而3’ UTR 发生的修饰有助于出核转运、翻译起始,以及与polyA结合蛋白一起维持mRNA的结构稳定。另外RNA甲基化阅读蛋白还能识别miRNA初级体上的m6A修饰,有助于miRNA成熟体的加工。一旦参与m6A修饰的酶出现异常会引起一系列疾病,包括肿瘤、神经性疾病、胚胎发育迟缓等。

目前,在全转录组范围检测m6A修饰的主流技术是MeRIP-seq(m6A-seq),该技术使用N6-甲基腺嘌呤抗体富集高甲基化的RNA片段,然后结合高通量测序,在全转录组范围检测m6A修饰。

标准信息分析

参考基因组比对区域分布


 

能够比对到参考基因组的Valid Data,依照参考基因组的区域信息,可以被定义为比对到exon(外显子)、intron(内含子)和intergenic(基因间隔区域)。正常情况下,Exon(外显子)区域的测序序列定位的百分比含量应很高,而比对到intron和intergenic区域的Reads,可能是由于前体mRNA(Pre-mRNA)的剪切事件、基因组注释不完整以及背景噪音等导致。

差异Peak基因GO富集性柱状图

 

GO富集性分析结果柱状图反映在生物过程(biological process)、细胞组分(cellular component)和分子功能(molecular function)富集的GO term上差异基因的个数分布情况。

差异Peak基因KEGG通路图

 

红色代表注释到某个ko节点且上调的显著差异表达基因,蓝色或紫色代表注释到某个ko节点且下调的显著差异表达基因。方框内的4位数字表示各种酶的EC编号;空心圆圈表示小分子化合物;实心箭头表示生化反应的方向;虚线箭头连接其他的相关代谢途径。本图仅为展示图片。

Motif分析

Motif本质上是一种具有生物意义的核酸序列模式,这些RNA甲基化相关的酶可识别这些Motif并与之结合,从而影响基因的表达。基因表达调控机制研究是生物学研究的重点内容,鉴定这些motif,对于基因表达调控机制研究具有重要意义。 使用Motif分析软件MEME在peak区域寻找可信度较高的motif,得到每个Motif的宽度、E-value、PFM、PSSM以及其在各个peak序列总的位置信息等。

 

 

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