Tritonx-100裂解液
Tritonx-100 Lysis Buffer
- PMK0534
- PUMOKE
- 湖北省武汉市
- 现货
- 100/500ml
- 110/420元
- 2022-07-22 12:03:48
武汉普美克生物科技有限公司
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- 英文名称
- Tritonx-100 Lysis Buffer
- 别名
- 无
- 关键词
- Tritonx裂解液PMK0534
- 溶液
- 1瓶
产品简介：
TritonX-100 裂解液是一种经典的快速裂解细胞组织并获得蛋白的裂解液。所获得的蛋白质可以用于PAGE 电泳，Western，免疫沉淀（IP）和免疫共沉淀（co-IP）等。产品组分有 TritonX-100、NaCl、Tris-HCl 等组成，并含有多种蛋白酶抑制剂成分，可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。原理是利用去污剂TritonX-100 破坏脂质双分子层，溶解胞质和细胞膜，破坏分子间微弱结合键的大部分蛋白质抗原。其浓度在0.1%-1%时即可满足几乎所有溶解的需求，且可补充等离子浓度的盐及使 pH 接近中性。用 TritonX-100 裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用 Bradford 法测定由 TritonX-100 裂解液获得样品的蛋白浓度。
保存条件：
-20℃保存，一年有效。
操作步骤：
（一）贴壁培养细胞
1、取 TritonX-100 裂解液置室温融解混匀，加入 PMSF，使 PMSF 终浓度为 1mM。
2、去除贴壁细胞的培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液清洗 1 次，低速离心，弃上清， 留取沉淀。
3、按照 6 孔板每孔加入 150～250μl 含有 PMSF 的 TritonX-100 裂解液，移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触，置于冰上或 4℃裂解。通常裂解液作用于细胞 1～3s 内，细胞就会被裂解。如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200～250μl。
4、10000～12000g，4℃离心 5～10min（如无低温离心机，室温下离心亦可），取上清。
5、后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
（二）悬浮培养细胞
1、取 TritonX-100 裂解液置于室温融解混匀后，加入 PMSF，使 PMSF 终浓度为 1mM。
2、低速离心悬浮细胞，弃上清，收集沉淀。
3、用手指轻弹细胞，使其松散。按照 6 孔板每孔细胞加入 150～250μl 含有 PMSF 的 TritonX-100 裂解液。如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200～250μl。再用手指轻弹以充分裂解细胞，充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。
4、10000～12000g，4℃离心 5～10min（如无低温离心机，室温下离心亦可），取上清。
5、进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
（三）组织样本
1、取 TritonX-100 裂解液置于室温融解混匀后，加入 PMSF，使 PMSF 终浓度为 1mM。
2、把组织剪切成细小的碎片，越小越好。
3、取在液氮或超低温冰箱中冷冻 30min 以上的组织，迅速研磨，研磨过程尽量控制在 1～2min 之内，以减少蛋白的降解。
4、按照每 20mg 组织加入 150～250μl 裂解液的比例，加入含有 PMSF 的裂解液，冰上或 4℃裂解 15～30min。
5、步骤 3、4 亦可采用如下过程：按照每 20mg 组织加入 150～250μl 裂解液的比例加入含有 PMSF 的 TritonX-100裂解液。用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆，直至充分裂解，该过程尽量控制在 1～2min 之内，以减少蛋白的降解。
6、10000～12000g，4℃离心 5～10min（如无低温离心机，室温下离心亦可），取上清。
7、进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
注意事项：
1. 为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。建议将其适当分装成合适的量，然后置于-20℃中保存。
2. 细胞裂解抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。
3. 建议在临用前数分钟内加入 PMSF，使 PMSF 的最终浓度为 1mM。PMSF 可以向我公司订购。
4. 在贴壁培养细胞的操作步骤中，去除贴壁细胞的培养液后，如果血清中的蛋白没有干扰，可以不用清洗。
5. 如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。
6. 在培养细胞的裂解液中，如果细胞量较多，必须分装成 50~100 万细胞/离心管，然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对容易裂解充分。
7. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈 vortex 使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器或研磨设备，缺点是不如匀浆器
或研磨那样裂解得比较充分。
8. 裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组 DNA 等的复合物。在不检测和基因组 DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。
9. 本产品对人体有毒，操作时请特别小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
10. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
11. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套和手套操作。
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