免疫组化
- MDL-06
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- 2023-07-27 14:48:56
北京百奥思科生物医学技术有限公司
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1.简介
免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。
样品要求
1 做石蜡切片的组织取样后应立即放入固定液中，避免冻存;
2 做冰冻切片应取用新鲜组织，以免抗原丢失。
常见问题
产生组织切片非特异性染色的原因抗体孵育时间过长、抗体浓度高易增加背景着色。这可通过缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是最重要的一条；
一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色，建议试用单克隆抗体看看；
内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高（含血细胞多的组织），需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色；
非特异性组分与抗体结合，这需要通过延长二抗来源的动物免疫血清封闭时间和适当增加浓度来加强封闭效果；
DAB孵育时间过长或浓度过高；
PBS冲洗不充分，残留抗体结果增强着色，在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤为重要；
标本染色过长中经常出现干片，这容易增强非特异性着色。
背景过深的原因可能是一抗浓度高；需要调整DAB孵育时间；考虑血清封闭的时间是否过短；适当增加抗体孵育后的浸洗次数和延长浸洗时间等。
