产品用途:TRAP染色试剂盒即是用于检测骨组织、骨细胞特征物质,显示组织中的破骨细胞,使其中破骨细胞呈红色。
产品原理:在含酒石酸的酸性条件下, TRAP能将萘酚AS-BI磷酸盐水解,产生的萘酚AS-BI与六偶氮副品红结合,在酶活性部位形成不溶性酒红色物质沉积,从而实现对抗酒石酸酸性磷酸酶的显色和定位,红色染料的形成可间接了解酸性磷酸酶的活性。
规格及主要组成成分:
试剂组成
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主要成分
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A.缓冲液(20ml/100ml)
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醋酸钠
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B. 亚硝酸钠溶液(1ml/5ml)
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亚硝酸钠
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C. 副品红溶液(1ml/5ml)
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副品红
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D. AS-BI磷酸盐底物溶液(1ml/5ml)
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苏木素萘酚AS-BI磷酸盐
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Mayer苏木素染液(20ml/100ml)
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苏木素
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工作液配置步骤:
• 取B液50ul与C液50ul在离心管混合均匀,为副品红溶液。
• 在上述100ul副品红溶液中加入100ul D溶液,混合均匀。
• 取A液1.8ml于上述混合液中,充分混匀。
• 混匀后经针式滤器过滤,则得到trap工作液。
备注:务必按照所属顺序配制工作液。注意工作液为现配现用。
染色步骤:
1. 石蜡切片常规脱蜡至水(冰冻切片省略这步)
2. 切片于纯水洗5分钟
3. 用组化笔在切片组织上画圈后,置于盛有纯水的湿盒中,用纯水37℃孵育2h。
4. 倒去组织上纯水后,切片重新放入湿盒,滴加现配过滤好的trap工作液完全覆盖于切片组织上,放于37℃烤箱避光染色20-30 min。
5. 倾去染液,水轻洗玻片
6. Mayer苏木素染液液滴染(浸染)1-2min,水洗。(此步骤为染核,可自选)
7. 切片经3缸无水乙醇,每缸5min → 直接放入 2缸二甲苯,每缸5min透明后,滴加中性树胶封片剂封片。
结果判读:破骨细胞呈酒红色,细胞核呈蓝色。
注意事项:D染液存放温度为-20℃,trap工作液为现配现用,提前估计好每次用量。
保存条件:2-8℃避光保存,一年有效。
温馨提示:使用前请详细阅读使用说明书,在有效期内使用,并做好个人防护。使用后请妥善处置废弃物。
生产企业名称:武汉博尔夫生物科技有限公司
地址:湖北省鄂州市葛店镇东湖高新智慧城25栋301室