miRNA 3′ UTR 克隆
- YJ-01
- 易锦生物
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- 2023-04-27 17:12:56
广州易锦生物技术有限公司
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产品介绍
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GeneCopoeia提供哺乳动物表达载体的人、小鼠、大鼠miRNA 3' UTR克隆，可用于miRNA靶标验证、预测靶标的功能确证和miRNA对靶标的调控作用的研究。
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本公司提供两套3'UTR报告载体。在pEZX-MT05载体中，我们将3'UTR序列（来源于公开的基因序列数据库）插入到Gaussia荧光素酶报告基因下游，在哺乳动物细胞中由SV40启动子驱动转录生成Gaussia荧光素酶（Gluc）和3'UTR靶标序列的嵌合mRNA，因此无需裂解细胞实时监测Gluc的表达，研究mRNA-miRNA的相互作用。在相同载体（pEZX-MT05）上带有分泌型碱性磷酸酶（SEAP）报告基因。CMV启动子驱动转录的SEAP作为同质粒内的对照，这种双报告系统可以对多样本常规转染进行精确比较。
pEZX-MT06是Firefly/Renilla双荧光素酶报告载体。3'UTR序列在Firefly（hLuc）荧光素酶报告基因下游，CMV启动子驱动转录的Renilla（hRLuc）作为同质粒内的对照。通过裂解细胞检测hLuc和hRLuc的表达。
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图1. miRNA 3' UTR克隆载体骨架
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图2. 靶标序列（3' UTR）表达克隆中miRNA的抑制作用
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已知LIN28基因是miR-125a的靶标。HEK 293细胞转染Lin28 miRNA靶标序列表达克隆（左）或者共转染miR-125a前体miRNA表达克隆（右）。转染24小时后检测GLuc 和内参SEAP活性。仅转染Lin28 miRNA靶标序列表达克隆的细胞中Gluc和SEAP活性之比定为1（左），以此确定共转样本中的比值。如图所示，miR-125a抑制了GLuc-LIN28-3'-UTR克隆中Gluc 70%以上的活性。
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优势
可进行活细胞分析
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分泌型GLuc报告基因
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无需裂解细胞
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节省时间和样本，减少突变，简化试验流程
双报告载体系统
可以对多样本常规转染进行精确比较
高通量兼容
多个样本可同时分析
高灵敏度
GLuc比萤火虫或Renilla荧光素酶灵敏度高1000倍
使用方便
所有靶标（3' UTR）克隆均可用于即时转染
载体与配套试剂盒
3' UTR 克隆载体及配套试剂盒
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载体
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报告基因
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示踪基因
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优势与特点
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配套的分析试剂盒
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pEZX-MT05
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Gaussia luciferase
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Secreted alkaline phosphatase (SEAP)
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适用于活细胞分析
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Secrete Pair ™ Dual Luminiscence Assay Kit
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pEZX-MT06
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Firefly luciferase
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Renilla luciferase
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需要裂解细胞
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Luc-Pair™ Duo-Luciferase Assay Kitt
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注意:
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miRNA靶标验证使用GeneCopoeia提供的pEZX-MT05和pEZX-MT06靶标克隆，我们推荐使用Secrete-Pair™ Dual Luminescence Assay Kit和Luc-Pair™ miR Luciferase Assay Kit。
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