弧菌显色培养基是青岛海博生物公司改良的培养基,用于食品、海产品、病人粪便样品和水产品中副溶血性弧菌的快速检测。副溶血性弧菌显蓝绿色且菌落比较大,霍乱弧菌和创伤弧菌显紫红色,溶藻弧菌显淡黄色或米黄色;其它细菌绝大部分被抑制。本培养基的特异性高,可以克服TCBS培养基引起的假阴性结果,是一种很理想的快速检测培养基。
成份(g/L)
特殊营养物质 |
75.0
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混合显色剂 |
4.45
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琼脂 |
15.0
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pH 8.6±0.1 25℃ |
此配方可以进行改良或增加营养成份以获得最佳的结果。
用法:
称取本品 18.9g 加入 200ml 蒸馏水,加热溶解并不停搅拌,煮沸3-5次。冷却至 45-50℃ 时,倾入无菌平皿。
注意:制备好的培养基表面不能太干燥。
原理:
利用弧菌自身代谢产生的酶与相应显色底物反应使菌落显色,以区分目标菌与非目标菌。显色底物是由产色因子和微生物部分可代谢物质组成,在特异性酶作用下,游离出产色因子使菌落显示一定颜色。
操作步骤
1、按国家标准、SN标准、FDA标准或其它方法制备样品液;
2、取 1ml 样品液加入 9ml SCPB肉汤或碱性蛋白胨水中,36±1℃ 增菌培养 18-24 小时;
3、用 3mm 接种环取 1 环增菌液,划线接种到弧菌显色培养基上,做 2 个平板;
4、36±1℃培养 18-24h,副溶血性弧菌显蓝绿色,菌落比较大;霍乱弧菌和创伤弧菌显紫红色,溶藻弧菌显淡黄色或米黄色,其它细菌绝大部被抑制;
5、对可疑菌落可划线接种到营养琼脂平板上,36±1℃ 培养 12-16 小时,挑取单菌落做副溶血性弧菌全套生化试验。
质量控制
1、外观
此干燥培养基的粉末均匀,具有良好的流动性,呈淡黄色。制备好的平板呈淡粉色至黄色固体培养基。
2、微生物试验
在36±1℃培养18-24h小时
质控菌株
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菌株编号
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生长情况
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菌落颜色
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副溶血性弧菌
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ATCC 17802
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+++
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蓝绿色,菌落比较大
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金黄色葡萄球菌
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ATCC 25923
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-
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-
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大肠杆菌
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ATCC 25922
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-
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-
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溶藻弧菌
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ATCC 17749
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+++
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淡黄色或米黄色
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非01群霍乱弧菌
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+++
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紫红色
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创伤弧菌
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ATCC 27562
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+++
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紫红色
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方法的局限性
本培养基不能直接鉴定霍乱弧菌,副溶血性弧菌的特异性可达 95%,准确性非常高,有时可能需做其它补充试验。
典型特征
典型副溶血性弧菌显蓝绿色且菌落比较大,霍乱弧菌和创伤弧菌显紫红色,溶藻弧菌显淡黄色或米黄色
贮存
制备好的平板可保存 2-5 天,应避免光线直接照射。干燥培养基应放置于阴暗干燥处, 保存温度 2-8℃,注意避光保存。
失效
干燥培养基超过保质期、结块和颜色变化都不能使用。
注意
此培养基仅供实验室使用。
参考文献
1、Kobayashi, T., S. Enomoto, R. Sakazaki, and S. Kuwahara. 1963. A new selective medium for pathogenic vibrios, TCBS(modified Nakanishi's agar). Jpn, J. Bacteriol. 18:387.
2、Nakanishi, Y. 1963. An isolation agar medium for cholerae and enteropathogenic halophilic vibrios. Modern Media. 9:246.
3、Baron, E. J., L. R. Peterson, and S. M. Finegold. 1994. Vibrio and related species, Aeromonas, Plesiomonas, Campylobacter,Helicobacter, and others, p. 429-444. Bailey & Scott's diagnostic microbiology, 9 th ed. Mosby-Year Book, Inc. St. Louis, MO.
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弧菌显色培养基的微生物灵敏度试验:
按标签用法制备培养基,接种以下质控菌株,放置36±1℃需氧培养18-24小时。