一、产品介绍:
本试剂盒是专门用于从细胞上清、尿液等非复杂样本中提取小细胞外囊泡sEV的纯化试剂盒。试剂盒采用分子排阻色谱的原理,根据被分离样本中组分的分子尺寸大小实现外泌体的分离。本试剂盒具有快速、高效、操作简单、对设备要求低等特点,可在30min内完成外泌体的分离纯化。提取的外泌体产物质量稳定可靠、蛋白污染程度低,可用于蛋白提取分析、RNA提取分析、细胞功能检测等下游生物学实验。
针对中小体积到大体积细胞上清等成分简单生物样本sEV分离提供系统性解决方案。
二、产品规格:
规格:ES933
1)ES933【3ml*3pcs】,单次上样3ml*3根*5次重复=45ml
应用:适用于非复杂细胞上清、尿液等浓缩后的45ml以内样本sEV纯化
对应支架为:ES933S,可以放置4根ES933规格的排阻柱进行操作,可重复使用;
对应适配器为:ES93A,用于一次性加入1-2倍柱体积的PBS或NaOH清洗液,可重复使用,有几根ES933排阻柱同时操作则需配备几个适配器。
三、产品概述:
关于外泌体纯化方法,国际细胞外囊泡协会(ISEV)的最小实验要求(MISEV2023)中根据不同的原理进行外泌体分离时,每种方法均有优缺点:
分子尺寸排阻色谱法SEC在诸多分离方法中一骑绝尘,因其优良的性能脱颖而出,获得广大EVs领域专家的青睐,在EVs专刊JEV中的研究占比日益提高。
恩泽康泰开发的基于SEC原理的外泌体分离纯化专利产品——Exosupur®试剂盒,自推出以来经受了市场和EVs领域专家的检验,在操作简便性、性能、稳定性和性价比上获得一致好评。
四、产品应用:
1、可兼容细胞上清、尿液等不同样本类型;
2、可用于不同样本的高通量测序、质谱等组学研究,以及下游的PCR、WB、WLISA验证等,纯度更高,杂质干扰更少,定量更准确;
3、可用于细胞、动物的功能机制研究,不影响外泌体性质和活性、不引入聚集和其他杂质等影响;
4、可用于工程化外泌体改造后再次纯化等研究;
5、可用于纯化相关的方法学开发中作为对照方法使用。
五、产品优势:
1、操作简便:无需特殊设备,柱平衡、上样、外泌体收集、外泌体浓缩四步操作,从上样到分离仅需30min。升级后的产品配套柱平衡或清洗的适配器,让操作更简便,解放双手;
2、性能优越:对于细胞上清样本可回收最高达95%,平均90%的荧光脂质体,杂蛋白去除率99%以上;
3、稳定性高:只回收固定尺寸范围的外泌体,产物粒径范围窄;实验受外界因素波动的影响比较小;不引入其他的物理化学因素,可以保持完整的外泌体形态和功能;
4、性价比高:可对排阻柱进行清洗再生,重复5次使用,可处理的样本量大;
5、质量可靠:高效便捷辅助客户发文70篇+,经受了行业专家的检验,获得北京市新技术新产品认定。
六、性能数据
Exosupur®分离的细胞上清外泌体TEM、WB和NTA表征。
Exosupur®最高可回收95%的荧光外泌体,平均90%,杂蛋白去除率99%以上。下图为3ml排阻柱ES933分离3mL浓缩的细胞上清的效果。
Protein K和RNase A双酶消化进一步证实了Exosupur®得到的RNA更多的是来源于囊泡,而囊泡外的游离RNA检测值更低,有利于RNA组学。
Exosupur®分离的外泌体进行蛋白质组研究时,可检测到丰富的囊泡特异的标志物蛋白,表明外泌体纯度高,可以更多检测外泌体来源的蛋白;可检测到比较多的蛋白数量,有利于不同样本之间的差异分析;与已发表文章、数据库具有较多overlap,表明数据可靠,能够准确的对外泌体蛋白进行研究。
对比不同的SEC分离方法:经过Exosupur®试剂盒收集的馏分,具有最高的荧光强度(A)和最低的蛋白质浓度(B和C),表明Exosupur®具有最有效的EVs回收率和最低的游离蛋白质污染。
七、常见问题
Q : Exosupur®外泌体纯化试剂盒能不能配套类似塑料试管架子,方便使用?
A : 我们有配套的排阻柱支架(ES914S和ES933S),需要单独购买。
Q : Exosupur®外泌体纯化试剂盒每次多倍柱体积PBS或清洗液冲洗,能不能配套有个缓冲器,不用反复添加?
A : 我们有配套的适配器(ES91A和EchoES93A),需要单独购买。
Q : 适配器跟排阻柱无法严丝合缝,存在漏液?
A : 调整一下适配器的方向,适配器插的稍微紧一点,正常现象不影响使用。
Q:该试剂盒分离外泌体需要自备的内容有哪些?
A:1)无菌PBS溶液(须用0.22μm滤膜过滤,建议新鲜配置或采购已过膜的PBS,4°C冰箱保存的PBS溶液需先平衡至室温);
2)20%无水乙醇(须超声条件脱气20min或配置好后静置过夜);
3)超滤管(截留分子量100kD);
4)收集管(1.5mL EP管和15mL离心管);
5)样品(上样前需平衡到室温)。
Q:样本收集完了,颜色还在中间,是否有问题?
A:按照操作说明来做,就没问题,一般是颜色滞后,因为颜色都是小分子成分,会靠后出来,外泌体会先流出,故不能以颜色作为外泌体收集的判断。
Q:用完了是直接用封闭液冲洗,还是2倍柱体积PBS冲了再用1倍柱体积封闭液冲?
A:如果本次接着用就不用封闭液清洗;如果本次不用了,需保存起来下次用,那么本次就用PBS冲洗后再封闭液冲洗。
Q:分离后的外泌体如何保存?
A:外泌体保存问题跟分离方法无关,是由其本身特性决定的,如果条件允许最好使用新鲜的外泌体进行实验,冻存的外泌体容易产生团聚并出现沉淀。实际研究中,外泌体功能实验往往需要大量的外泌体不得不分批提取保存时可-80℃保存;但做biomarker研究时,如RNA组学等,提取外泌体后需尽快完成RNA提取等后续实验。