一、样品提取


称取5.0 g样品于50 mL离心管中，加入浓度为1 μg/mL同位素内标利巴韦林-13C5溶液10 μL，加入12 mL 20 g/L三氯乙酸水溶液和2.5 mL乙腈，涡旋混匀30 s，超声10 min，于8000 r/min离心5 min，上清液全部转移至50 mL离心管中，再向样品中加入10 mL 20 g/L三氯乙酸水溶液重复提取一次，合并两次提取液，用三氯乙酸水溶液定容至25 mL，再准确移取5 mL，用氨水调节pH至8.5（±0.1）待净化（本实验是采用阴性样本做基质加标实验，故省略酶解步骤）。

 


二、SPE净化（GL PBA, 100 mg/3 mL）


（1）活化：向PBA柱中依次加入3 mL乙腈，3 mL 0.25 mol/L乙酸铵缓冲液（pH=8.5）进行活化。

（2）上样和洗脱：取上述待净化液过柱，控制流速不超过1 s/滴，然后用3 mL 0.25 mol/L乙酸铵缓冲液（pH=8.5）淋洗小柱，弃去全部流出液，抽干小柱，用2 mL 0.1 mol/L甲酸水溶液洗脱，抽干小柱，收集全部洗脱液。

（3）上机：取上述洗脱液过0.22 μm PES水系滤膜，供上机分析。




三、标曲配制


采用内标法定量，分别精密量取适量的利巴韦林标准溶液和同位素内标利巴韦林-13C5工作液，用0.1 mol/L甲酸水溶液配制成适当浓度的标准工作溶液。




四、仪器条件


色谱条件

仪器：UPLC-MS/MS（Thermo Fisher TQS Endura）

色谱柱： HILIC，2.1 mm×100 mm，3 μm

流动相：A：5 mmol/L乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）  B：乙腈

洗脱方式：梯度洗脱，见表1


表1 梯度洗脱程序




流速：0.4 mL/min

柱温：30 ℃

进样量：2 μL

质谱条件


离子源：HESI            电喷雾电压：3500V

鞘气压力：40 arb         辅气压力：1 arb

离子传输管：300 ℃      辅气温度：400 ℃

表2 组分名称、保留时间及特征离子一览表（*为定量离子）





五
、实验结果


表3 添加水平为2.0 μg/kg动物源性食品中利巴韦林加标回收实验结果






产品列表