货号 PH0311
名称 细菌细胞总蛋白提取试剂盒 (Bacterial Cell Protein Extraction Kit)
规格 50T
存储 Store at 4℃ (本试剂在室温干燥条件下，可保存6 个月。溶菌酶贮存液、100×蛋白酶抑制剂和50%甘油2-8℃保存)
 
试剂盒组成
细菌细胞蛋白裂解液 50ml
细菌细胞漂洗液 120ml
溶菌酶贮存液 3ml
100×蛋白酶抑制剂 0.6ml
50% 甘油 10ml
说明书 1份

产品简介

1、 总论：经典的细胞蛋白质分离流程由下述主要步骤组成：清洗组织或细胞；裂解细胞；离心去沉淀获得可溶性蛋白质粗提物（可依据目标蛋白质的理化特性特别的调配裂解缓冲液）； 通过有机溶剂或盐析等沉淀离心、层析、电泳等方法进一步纯化，得到目的产物蛋白。

2、 本试剂使用温和的非离子型去污剂，适用于大肠杆菌表达的重组蛋白的蛋白提取。本产品可应用于从细菌裂解液中提取可溶性蛋白。所提取的蛋白保持了生物学活性，可进行 IP，Western Blot，蛋白纯化等下游操作。

使用说明

1、离心收集细菌细胞, 按照每克湿菌取用 5-6ml 细菌细胞漂洗液的比例，于 20℃～37℃将细胞悬浮起来后，4℃，12000g，1-2min 离心除去细菌细胞漂洗液，漂洗2次。（离心只是收集细胞，转速、时间可自行调整。）
>如果细菌细胞漂洗液不够，也可以用 TE buffer（H=7.4 --7.6）代替。 
 
2、离心除去细菌细胞漂洗液后，按每克湿菌细胞，加入 5ml细菌细胞蛋白裂解液，250ul溶菌酶贮存液和50ul 100×蛋白酶抑制剂，混悬细菌细胞样品。 
 
3、混旋或颠倒试管几次后，20℃～37℃温育 10～20 分钟，同时轻轻摇动。
>若蛋白表达量较低，建议结合超声粉碎，置冰上后，采用300w，10s 超声/10s 间隔，超声20min，至菌液变清或者变色。
>若目的蛋白不稳定，可冰浴中孵育，且时间可以减少，裂解液内加入 0.2 倍体积 50%甘油也可以稳定目的蛋白。

4、细胞破碎后的匀浆液，根据您不同需要可以在10000g 离心10min到100000g 离心1h范围离心。沉淀弃去。上清即为含有目的蛋白质的粗提物。


注意事项

若目的蛋白不稳定，冰浴中孵育时间可以减少甚至取消，裂解液内加入0.2 倍体积50%甘油也可以稳定目的蛋白。

*请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项！