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蛋白酶K是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。拥有典型的丝氨酸活性位点：Asp39–His69–Ser224。切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键。

该酶有两个Ca2+结合位点，它们离酶的活性中心有一定距离，与催化机理并无直接关系。然而，如果从该酶中除去Ca2+，由于出现远程的结构变化，催化活性将丧失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。所以，蛋白酶k消化过程中通常加入EDTA(以抑制依赖于Mg2+的核酸酶的作用)。但是，如果要消化对蛋白酶k具有较强耐性的蛋白，如角蛋白一类，则可能需要使用含有1mmol/l Ca2+而不含EDTA的缓冲液。在消化完毕后、纯化核酸前要加入EGTA(ph8.0)至终浓度为2mmol/l,以鳌合Ca2+。

 

酶活力单位定义

在37℃下，以血红蛋白为底物，1分钟内可以产生相当于1微摩尔酪氨酸Folin阳性的氨基酸或多肽的蛋白酶K的量，定义为一个单位蛋白酶K酶活力。

 

分子量：28,900 Da

 

最适pH：7.5-9.0

 

等电点：8.9

 

助活

蛋白酶K在很宽的pH范围内有效，有效的pH范围为pH4.0-12.5，最佳pH范围为pH7.5-8.0。 最佳反应温度为65℃，但在65℃或更高的温度蛋白酶K自身的也非常迅速地降解。很多时候反应温度选择50-55℃。 

在0.2-1%SDS或约10mM尿素存在的情况下，蛋白酶K显示更高的酶活性。蛋白酶K的常用工作浓度为0.05-1mg/ml，根据所用缓冲液是否含有SDS、尿素、pH是否适合、温度是否适合等因素确定具体的工作浓度。

EDTA等螯合剂或SDS等去垢剂均不能使之失活。

 

配制说明

用10 mM Tris-HCl, pH 7.5, 10 mM CaCl2缓冲液配制成20mg/ml的蛋白酶K溶液，分装冻存在-20℃。

 

保存及稳定性

冻干粉在-20℃下可保存三年以上。

 

 

用途：

1. 主要用在基因诊断试剂盒、基因组DNA提取试剂盒、RNA提取试剂盒中去除DNA和RNA制备中的核酸酶。

2. 可以于提取组织中非蛋白成份降解含有蛋白质的杂质,譬如DNA疫苗和肝素的制备等。

3. 还可制备脉冲电泳的染色体DNA及蛋白质印迹。