产品概述

 为确保产品的性能和无忧的操作，使用前请仔细阅读本手册，有任何疑问请咨询本公司技术支持或当地的销售人员。

DEAE Focurose FF是弱阴离子交换介质，适用于蛋白、多肽、核酸等所有带电的生物分子的分离纯化。中等颗粒设计，多应用样品的初步捕获和中度纯化。

 

1 产品介绍

特点：

a.容易放大。

b.兼顾流速性能和分辨率。

c.高化学耐受性。

d.便于维护。

 

表1：DEAE Focurose FF 性能参数

基质	6%高度交联的琼脂糖
粒径范围	45-165µm
平均粒径	90±5µm
介质类型	弱阴离子交换
带电基团	-N+(C2H5)2H
离子载量	0.11-0.16mmol Cl-/ml介质
操作压力	≤0.3MPa
流速	≧300cm/h
pH稳定性	2-9（工作）/2-12（长期）/ 2-14（短期）
化学稳定性	常用缓冲液、1.0M氢氧化钠、8M 尿素、6M 盐酸胍、70%乙醇
避免使用	氧化剂、阴离子型去污剂、阴离子型缓冲液
贮存溶液	20%乙醇
贮存温度	4-30℃

 

2 选择指导

2.1 离子交换介质的选择

图1：离子交换介质的选择

说明：

a.当目标物所在溶液的pH˂目标物的等电点时，选择阳离子交换介质。

b.当目标物所在溶液的pH˃目标物的等电点时，选择阴离子交换介质。

c.所使用溶液的pH应该在离子交换介质的使用pH范围以内。

2.2 缓冲溶液的选择

表2：阴离子交换缓冲液

pH范围	缓冲盐	浓度（mM）	平衡离子	pKa(25℃)
4.3-5.3	N-Methylpiperazine	20	Cl-	4.75
4.8-5.8	Piperazine	20	Cl-或HCOO-	5.33
5.5-6.5	L-Histidine	20	Cl-	6.04
6.0-7.0	bis-Tris	20	Cl-	6.48
6.2-7.2	bis-Tris propane	20	Cl-	6.65
7.3-8.3	Triethanolamine	20	Cl-或CH3COO-	7.76
7.6-8.6	Tris	20	Cl-	8.07
8.0-9.0	N-Methyl-diethanolamine	20	SO42-	8.52
8.0-9.0	N-Methyl-diethanolamine	50	Cl-或CH3COO-	8.52
8.4-9.4	Diethanolamine	50	Cl-	8.88
8.4-9.4	Propane 1,3-Diamino	20	Cl-	8.88
8.6-9.6	bis-Tris propane	20	Cl-	9.10
9.0-10.0	Ethanolamine	20	Cl-	9.50
9.2-10.2	Piperazine	20	Cl-	9.73
10.0-11.0	Propane 1,3-Diamino	20	Cl-	10.55
10.6-11.6	Piperidine	20	Cl-	11.12

 

表3：阳离子交换缓冲液

pH范围	缓冲盐	浓度（mM）	平衡离子	pKa(25℃)
1.4-2.4	Maleic acid	20	Na+	1.92
2.6-3.6	Methyl malonic acid	20	Na+或Li+	3.07
2.6-3.6	Citric acid	20	Na+	3.13
3.3-4.3	Lactic acid	50	Na+	3.86
3.3-4.3	Formic acid	50	Na+或Li+	3.75
3.7-4.7	Succinic acid	50	Na+	4.21
4.3-5.3	Acetic acid	50	Na+或Li+	4.75
5.1-6.1	Succinic acid	50	Na+	5.64
5.2-6.2	Methyl malonic acid	50	Na+或Li+	5.76
5.6-6.6	MES	50	Na+或Li+	6.27
6.7-7.7	Phosphate	50	Na+	7.20
7.0-8.0	HEPES	50	Na+或Li+	7.56
7.8-8.8	BICINE	50	Na+	8.33

 

说明：

a.按照表2和表3选择缓冲溶液的种类和浓度。

b.错误的缓冲液（种类和浓度）会干扰分离效果(如分离度、载量、pH波动等)。

c.所使用缓冲液的pH应该在离子交换介质的使用pH范围内。

d.使用分析纯或者更高纯度的缓冲液。

e.在溶液配制后，须经过滤（平均粒径<45µm，用0.22µm过滤；45µm<平均粒径<165µm，用0.45µm过滤；平均粒径>165µm，用0.8µm过滤）和脱气处理（超声或负压）。

 

3 样品的制备

样品所在溶液要和平衡液保持一致，可以用平衡液稀释或透析/超滤/G25进行缓冲液置换。

样品过滤（平均粒径<45µm，用0.22µm过滤；45µm<平均粒径<165µm，用0.45µm过滤；平均粒径>165µm，用   0.8µm过滤）。

 

4 纯化流程（以XK16/10为例）

采用液滴对液滴（避免引入气泡）的方式将柱子连接到层析系统上。

用平衡液以5ml/min的流速冲洗5CV（CV指柱床体积，下同）。

用洗脱液以5ml/min的流速冲洗5CV。

用平衡液以5ml/min的流速冲洗10CV。

将样品以5ml/min的流速上样。

用平衡液以5ml/min的流速冲洗10CV。

用洗脱液以5ml/min洗脱5CV或20CV(根据前期筛选实验数据，采用阶梯式洗脱5CV/线性梯度洗脱20CV)。

用再生液以5ml/min的流速冲洗5CV。

备注：再生液=平衡液+1M NaCl，其它组分不变。

 

5 放大

保持柱床高度不变

5.2 保持线性流速不变

备注：若实际情况和实验室数据有偏差，可以维持停留时间不变。

 

6 维护

6.1平衡

柱子装填完成后，用平衡液以60cm/h的流速冲洗5CV或冲洗至电导和pH值恒定。

6.2再生

每次分离纯化后，用再生液以60cm/h的流速冲洗5CV或冲洗至电导和pH值恒定。

6.3在位清洗

在位清洗用于清洗再生没有清洗干净的物质，例如脂类、沉淀物、变性蛋白。

a.强离子结合蛋白

用2.0M NaCl以60cm/h的流速反向冲洗5CV。

b.沉淀物、疏水结合蛋白、脂蛋白

用1.0M NaOH以30cm/h的流速反向冲洗5CV。

c.脂类、强疏水蛋白。

用1.0M NaOH，30%异丙醇以30cm/h的流速反向冲洗5CV

6.4消毒

用1.0M NaOH以30cm/h的流速反向冲洗5CV。

6.5灭菌

将介质置换到0.5M NaCl ,pH 7.0的溶液中进行高压灭菌。

6.6保存

介质在20%乙醇中4-30℃保存。

 

7 订购信息

表4：订购信息表

产品	规格	货号
DEAE Focurose FF	25ml	HL060307025M
DEAE Focurose FF	100ml	HL060307100M
DEAE Focurose FF	500ml	HL060307500M
DEAE Focurose FF	1L	HL060307001L
DEAE Focurose FF	5L	HL060307005L
DEAE Focurose FF	20L	HL060307020L

备注：大规格包装产品或其它产品购买，请咨询本公司当地销售或售前技术支持。