CM 6FF弱阳离子交换预装柱，5 mL
- 20555ES08
- 翌圣
- 上海市
- 现货
- 5 mL
- 618.00 元
- 2023-04-10 15:41:59
翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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产品描述
离子交换主要包括强阳离子交换、弱阳离子交换、强阴离子交换和弱阴离子交换4种，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的分离纯化。CM弱阳离子交换层析填料FF以高度交联的6%琼脂糖为基架，可耐受较高的流速及更高的化学稳定性，适合实验室及工业大规模纯化。本品带电基团-O-CH2COO–。本品CM弱阳离子交换预装柱是CM弱阳离子交换层析填料FF的中压预装柱，规格为5 mL，该预装柱具有标准接口，可以适配商品化的各类中压色谱系统，如ÄKTA等，方便客户操作。
产品性质
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基质
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高度交联的6%琼脂糖微球
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粒径
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45-165 µm
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离子交换类型
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弱阳离子
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载量
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～0.09-0.13 mmol H+/mL 基质
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耐压
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0.3 MPa
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建议流速
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300-600 cm/h
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pH范围
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4-13（长期）/ 2-14（短期）
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储存缓冲液
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20%乙醇
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柱子尺寸
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1.6×2.5 cm（5 mL）
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运输和保存方法
冰袋运输。2-8℃保存，有效期2年。
使用方法
1 缓冲液的准备
应选择缓冲基团不与介质作用的缓冲盐，平衡缓冲液宜采用低盐和低 pH（通常低于目的物等电点 1 个 pH 单位）缓冲液以有利于目的物的结合，同时需要考虑目的物在缓冲液中的稳定性。洗脱缓冲液通常为在平衡缓冲液中加入高浓度盐（如 1M NaCl）的缓冲液或高 pH 洗脱。所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤。
表1：阳离子交换缓冲液
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pH 范围
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缓冲盐
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浓度（mM）
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平衡离子
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pKa(25℃)
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1.4-2.4
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Maleic acid
|
20
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Na+
|
1.92
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2.6-3.6
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Methyl malonic acid
|
20
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Na+或 Li+
|
3.07
|
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2.6-3.6
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Citric acid
|
20
|
Na+
|
3.13
|
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3.3-4.3
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Lactic acid
|
50
|
Na+
|
3.86
|
|
3.3-4.3
|
Formic acid
|
50
|
Na+或 Li+
|
3.75
|
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3.7-4.7
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Succinic acid
|
50
|
Na+
|
4.21
|
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4.3-5.3
|
Acetic acid
|
50
|
Na+或 Li+
|
4.75
|
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5.1-6.1
|
Succinic acid
|
50
|
Na+
|
5.64
|
|
5.2-6.2
|
Methyl malonic acid
|
50
|
Na+或 Li+
|
5.76
|
|
5.6-6.6
|
MES
|
50
|
Na+或 Li+
|
6.27
|
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6.7-7.7
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PhoCMhate
|
50
|
Na+
|
7.20
|
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7.0-8.0
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HEPES
|
50
|
Na+或 Li+
|
7.56
|
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7.8-8.8
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BICINE
|
50
|
Cl-
|
8.33
|
2 样品准备
样品在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。
3 样品纯化
1）将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口，将预装柱接到色谱系统中，并旋紧。
2）用3-5倍柱体积的去离子水冲洗出存储缓冲液。
3）使用至少5倍柱床体积的结合Buffer平衡色谱柱。
4）利用泵或注射器上样。
【注】样品的粘度增加使得即使上样体积很少也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
5）用洗杂Buffer冲洗柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线（一般至少10-15个柱体积）。
6）用洗脱Buffer采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中，通常5倍柱体积洗脱液就足够了。可以用一个小的梯度，例如20倍柱体积或更多，来分离不同结合强度的蛋白质。
5 填料清洗
离子交换填料每次使用后可以用1M NaCl甚至更高离子强度溶液或高pH溶液清洗，然后用至少5倍柱体积的Buffer进行平衡至离子强度或pH值稳定。
CIP（Cleaning In Place）清洗
离子交换填料可以重复使用而无需再生，但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量都下降，这时可按照下面方法对填料进行清洗。
1）去除一些沉淀或变性物质
用2倍柱体积的1 M NaOH溶液进行清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。
2）去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质
用3-4倍柱体积的70%乙醇或3-4倍柱体积的1% Triton™ X-100清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。
3）去除一些离子键结合物质
用3-4倍柱体积的2 M NaCl清洗，然后立即用5倍柱体积的PBS, pH 7.4清洗。
注意事项
1）请勿冷冻保存本产品。
2）为了得到良好的分离效果，避免缓冲液与层析柱有太大温差变化。
3）层析柱可以放在层析冷柜中使用，但是需要适当降低流速。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
5）本产品仅作科研用途！
附表 问题及解决方案
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问题
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可能原因
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推荐解决方案
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柱子反压过高
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填料被堵塞
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按照【填料清洗】部分对填料进行清洗。
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样品中含有微小的固体颗粒，建议使用前用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤。
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洗脱样品较杂
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填料重复多次使用
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按照【填料清洗】部分对填料进行清洗或更换新填料。
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平衡不充分
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增加平衡液体积，确保填料充分平衡/洗杂。
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