概念

免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。目前我们可以对石蜡切片、冰冻切片、细胞爬片、组织芯片进行免疫荧光检测。

原理

免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性，所以当抗原抗体发生反应时，只要知道其中的一个因素，就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应的抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。

实验流程

（1）石蜡切片脱蜡至水，或者制作的冰冻切片用冷丙酮在4℃固定10－20分钟；
（2）抗原修复，冰冻切片无需修复；
（3）用0.01M PBST漂洗3次，每次5 min；
（4）滴加正常的血清室温封闭30 min；
（5）加未标记的特异性抗体，4℃过夜；
（6）用0.01M PBST漂洗3次，每次5 min（震荡漂洗）；
（7）加荧光标记的二抗抗体，37℃湿盒避光作用30 min；
（8） 0.01M PBST避光漂洗3次，每次5 min；
（9）甘油缓冲液封片；
（10）荧光显微镜观察。