Recombinant Human Ubiquitin Ligase E3(UBE3) kit 重组人泛素连接酶试剂盒
- 20439ES20
- 翌圣
- 上海市
- 现货
- 20 µL
- 1355.00 元
- 2023-04-10 14:28:12
翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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产品描述
泛素化是通过三个酶促步骤实现的。在ATP依赖的过程中，泛素激活酶(E1)催化与泛素形成活性硫酯键，然后转移到泛素载体蛋白的活性位点半胱氨酸(E2)。泛素级联对特定底物蛋白的选择性依赖于E2结合酶(细胞中包含的相对较少)和泛素-蛋白连接酶(E3)之间的相互作用，迄今为止已经鉴定出600多种这种酶。E3s是一个大的，多样化的蛋白质组，其特征是几个确定的基序之一。这些包括HECT(与e6相关蛋白c端同源)，RING(真正有趣的新基因)或U-box(没有Zn2+结合配体的完整补充的修饰的RING基序)结构域。而HECT E3s在泛素化过程中具有直接的催化作用，RING和U-box E3s促进蛋白质泛素化。 后两种E3类型充当适配器类分子。 它们使E2和底物足够接近，从而促进底物的泛素化。虽然许多RING-type e3，如MDM2和c-Cbl，可以单独发挥作用，但其他一些是作为更大的多蛋白复合体的组成部分，如后期促进复合体。综上所述，这些多面的特性和相互作用使E3s能够利用泛素-蛋白酶体系统，在真核生物的所有细胞中提供一种强大而具体的蛋白质清除机制。E3s的重要性突出体现在其调节的正常细胞过程的数量，以及与其功能丧失或靶向不当相关的疾病的数量。
产品性质
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来源（Source）
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E.coli
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分子量（Molecular Weight）
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E3酶大约102kDa,底物蛋白大约40.7kDa。
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外观（PhZZysical Appearance）
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液体
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标签（Tag)
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无
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纯度（Purity）
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> 95% by SDS-PAGE
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储存液（Stock）
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0.88 mg/ml (25 µM) in 50 mM HEPES pH 7.5, 200 mM NaCl, 10% Glycerol
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浓度(concentration)
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见管外标签
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产品组分
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组分编号
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组分名称
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规格
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20439-A
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重组人泛素连接酶E3
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20 μL
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20439-B
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修饰底物蛋白
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20 μL
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反应缓冲液配方
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名称
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组分
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浓度
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10 ×Reaction Buffer (200 μL)
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Tris PH 8.0
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500 mM
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DTT
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6 mM
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ddH2O
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to 200 μL
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10 × ATP-Mg (200 μL）
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ATP
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100 mM
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MgCl2
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100 mM
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ddH2O
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to 200 μL
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阳性反应体系
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组分
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体积 (μL)
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ddH2O
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to 20 μL
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10 × Reaction Buffer
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2 μL
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10 × E1 Enzyme
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2 μL
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5 × Ubiquitin
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4 μL
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10 × ATP-Mg
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2 μL
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20 × E2 Enzyme
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1 μL
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10 × E3 Ligase Itch (Positive control)
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2 μL
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20 × S5a substrate (Positive control)
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1 μL
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反应条件
37℃孵育（30 min-2 h，如果效果不明显可增加反应时间12 h），建议使用PCR仪或金属浴。
结果检测
1. 取样品20 μL加入5 μL的5× SDS-PAGE Buffer（加入1 μL新鲜配制的1M DTT），加热样品95℃ 5 min，随后使用还原性（含DTT）上样缓冲液进行SDS-PAGE电泳分析;
2. 选择E3 Ubiquitin Ligase、泛素、Substrate抗体进行Western-blot分析。
1. 取样品20 μL加入5 μL的5× SDS-PAGE Buffer（加入1 μL新鲜配制的1M DTT），加热样品95℃ 5 min，随后使用还原性（含DTT）上样缓冲液进行SDS-PAGE电泳分析;
2. 选择E3 Ubiquitin Ligase、泛素、Substrate抗体进行Western-blot分析。
运输与保存方法
冰袋运输。-20℃保存，建议第一次使用时分装冻存。
注意事项
1. 避免反复冻融。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3. 本产品仅作科研用途！
