GST Focurose 4FF
- HQ030307
- 武汉汇研
- 湖北省武汉市
- 现货
- 20L
- 5L
- 1L
- 500ml
- 100ml
- 25ml
- 5ml（预装柱）
- 1ml（预装柱）
- 240000 元
- 2022-09-15 14:31:01
武汉汇研生物科技有限公司
产品概述
为确保产品的性能和无忧的操作，使用前请仔细阅读本手册，有任何疑问请咨询本公司售后技术支持或当地的销售人员（联系方式见附录）。
1.产品介绍
GST Focurose 4FF适用于分离纯化GST标签蛋白、谷胱甘肽S-转移酶或谷胱甘肽依赖性蛋白。
特点：
a.快速、简单（一步纯化）。
b.载量高、流速快、易于放大。
c.温和的洗脱条件可以完整的保留蛋白的生物学活性。
表1：介质性能参数
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基质 |
高度交联4%的琼脂糖 |
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粒径范围 |
45-165µm |
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平均粒径 |
90±5µm |
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结合载量 |
>10mg(GST标签蛋白)/ml(介质) |
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pH稳定性 |
3-12 |
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化学稳定性 |
所有常用水溶液，如：1M醋酸盐，pH 4.0、0.1M NaOH、70%乙醇、8M尿素、6M 盐酸胍。 |
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流速 |
≧250cm/h |
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操作压力 |
≤0.3MPa |
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贮存溶液 |
20%乙醇 |
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贮存温度 |
4-30℃ |
2.溶液制备
平衡液：0.14M NaCl、0.0027M KCl、0.01M Na2HPO4、0.0018M KH2PO4，pH 7.3。
洗脱液：0.05M Tris-HCl、0.01M GSH，pH 8.0
3.样品制备
3.1样品所在溶液要和平衡液保持一致，可以用平衡液进行裂解、透析/超滤/G25进行缓冲液置换。
3.2样品过滤（平均粒径<45µm，用0.22µm过滤；45µm<平均粒径<165µm，用0.45µm过滤；平均粒径>165µm，用 0.8µm过滤）。
4.纯化流程（以XK16/10为例）
4.1采用液滴对液滴（避免引入气泡）的方式将柱子连接到层析系统上。
4.2用纯化水以5ml/min的流速冲洗5个CV。
4.3用平衡液以5ml/min的流速冲洗10个CV。
4.4将样品以1ml/min的流速上样。
4.5用平衡液以5ml/min的流速冲洗至紫外吸收值平稳（10-15个CV）。
4.6用洗脱液以5ml/min的流速洗脱10CV。
5.放大
保持柱床高度不变
5.2 保持线性流速不变
备注：若实际情况和实验室数据有偏差，可以维持停留时间不变。
6.清洗
清洗后可以去除一些强结合性物质（例如一些强结合的蛋白、变性蛋白、脂类等），从而达到恢复介质的优良性能（例如载量、流动性、柱效等）。
建议每使用5次后进行一次清洗，具体清洗频率需根据纯化的初始样品的洁净度进行调整。
6.1 用5CV 1.0%Triton X-100或70%乙醇冲洗后，立即用10CV纯化水冲洗。
备注：用于去除疏水结合物质。
6.2 用5CV 8M尿素或6M盐酸胍冲洗后，立即用10CV纯化水冲洗。
备注：用于去除聚集在介质中的沉淀或变性物质。
6.3 用10CV的20%乙醇冲洗后保存。
备注：20%乙醇可以防止微生物的生长，20%乙醇保存的介质可以在4-30℃（4-8℃更佳）保存。
7.常见问题
表2：常见问题及解决方案
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问题 |
可能原因 |
解决方案 |
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纯化时目标物不与介质结合 或结合量较低 |
1.上样量过载 |
降低上样量 |
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2.上样流速过快 |
降低上样流速 |
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3.蛋白或脂类在介质中聚集 |
及时有效地清洗介质或更换新的介质 |
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4.样品在超声裂解过程中失活 |
采用较为温和的条件进行超声裂解 |
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5.样本或平衡液中pH不在正确的范围 |
保证样本和平衡液pH在6.5-8.0以内 |
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6.表达条件过于剧烈,目标物构象发生改变，不能与介质结合 |
建议做一个空载体作为表达和纯化的对照 |
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7.目标物质发生聚集 |
在裂解前加入1-10mM DTT |
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洗脱时没有收集到目标物 或只收集到少量目标物 |
1.目标物没有与介质结合或结合量较少 |
先确认目标物是否与介质结合 |
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2.洗脱条件不合适 |
加大GSH浓度到20-40mM，并保证洗脱液pH在8.0-9.0以内 |
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3.洗脱时间不够 |
降低流速，延长洗脱液的保留时间 |
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4.洗脱体积过小 |
加大洗脱体积 |
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5.目标物在洗脱液条件下出现聚集沉淀 |
检测目标物在洗脱液条件（pH）下的溶解度和稳定性。可以尝试在洗脱液中加入一些添加剂：如0.1%Triton X-100或2%N-octyl glucoside |
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目标物纯度较低
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1.样品没有经过前处理 |
样品上柱前必须要经过离心或过滤 |
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2.样品粘度过高 |
用平衡液适当的稀释样品，降低粘度。 |
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3.洗杂不彻底 |
加大洗杂体积直至基线平稳并与平衡液一致 |
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4.杂质蛋白或脂类在介质中聚集沉淀 |
及时有效地清洗介质 |
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5.洗脱条件不佳，洗脱流速太快、梯度太陡。 |
优化洗脱条件 |
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6.目标物出现降解 |
检测目标物的稳定性 |
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7.柱料装填效果不佳 |
重新装填或购买 |
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8.杂质出现非特异性吸附 |
适当选择添加剂降低非特异性吸附 |
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9.分离柱顶部有较大储样体积 |
重新装柱或降低储样体积 |
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10.介质中有微生物生长 |
介质使用完后，请及时正确保存介质 |
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介质载量下降 |
1.上样流速过快 |
降低上样流速 |
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2.蛋白或脂类在介质中聚集，导致载量下降。 |
及时清洗介质 |
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3.使用次数过多，配基被氧化或脱落 |
及时清洗介质或更换新介质 |
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4.样品在超声裂解或表达时构象改变，不能较好的与配基结合 |
采用温和的裂解方式或表达条件 |
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色谱峰上升过陡 |
介质装填过紧 |
重新装柱 |
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色谱峰上升过缓或拖尾 |
介质装填太松 |
重新装柱 |
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柱床有裂缝或干涸 |
出现泄露或大体积气泡引入 |
检查管路是否有泄露或气泡，重新装柱 |
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液流较慢 |
1.蛋白或脂类聚集 |
及时清洗介质或滤膜 |
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2.蛋白沉淀在介质中 |
调整平衡液和洗脱液组分，以维持目标物的稳定性和介质的结合效率 |
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3.分离柱中微生物生长 |
所用试剂必须经过过滤和脱气； 样品上柱前必须离心或过滤 |
8.订购信息
表3：订购信息表
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产品 |
规格 |
货号 |
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GST Focurose 4FF |
25ml |
HQ030307025M |
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GST Focurose 4FF |
100ml |
HQ030307100M |
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GST Focurose 4FF |
500ml |
HQ030307500M |
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GST Focurose 4FF |
1L |
HQ030307001L |
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GST Focurose 4FF |
5L |
HQ030307005L |
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GST Focurose 4FF |
20L |
HQ030307020L |
备注：大规格包装产品或其它产品购买，请咨询本公司当地销售或售前技术支持。
