黄曲霉毒素免疫亲和柱

简介

    AFT免疫亲和柱适用于基质复杂、限量要求低的样品中黄曲霉毒素B1，B2，G1，G2检测的净化。可以进行TLC、HPLC、GC、LC-MS/MS、EIA的定量分析，适用于谷物，食品，饲料等的样品净化过程。

柱容量  约200ng 黄曲霉毒素

储存条件  2-8℃冷藏保存，不可冷冻

1 用途

用于实验室净化样品提取物以进行进一步分析

2 概要

黄曲霉毒素是谷类及其他农作物常见的霉变菌，是由黄曲霉和寄生曲霉产生的一类低分子化合物。污染粮食、油料作物的种子，其中以花生、玉米易被污染，另外在小麦、高粱、巴西坚果、豆类和大米等重要粮食中也经常被检出。

黄曲霉毒素热稳定性很高，一旦产生便难以除去。对动物、植物和微生物具有很强的毒性，致癌力强，还能引起突变和导致畸形。

黄曲霉毒素作为肝癌的三大诱因之一，也是胃癌，肠癌等疾病的主要原因，对人类的健康构成很大威胁。世界各国对食品，饲料中的黄曲霉毒素都有严格的限量标准。

3 原理

测定的基础是抗原抗体反应，免疫亲和柱中含有和黄曲霉毒素抗体结合在一起的凝胶，样品中的黄曲霉毒素经过提取、过滤、稀释，然后缓慢的通过黄曲霉免疫亲和层析柱，在免疫亲和柱内黄曲霉毒素与抗体结合，其他的无关物质不会结合而直接通过免疫亲和柱，之后洗涤免疫亲和柱完全除去没有被结合的其他无关物质。后加入甲醇将黄曲霉毒素释放，然后注入到分析仪器中进行进一步的检测。

4 提供的试剂

l 25支/盒免疫亲和柱，规格：1ml/3ml

5  操作者应注意事项

l 黄曲霉毒素对人体有害，应戴手套操作。

l 使用过的玻璃容器及黄曲霉毒素溶液宜用5%浓度的次氯酸钠溶液浸泡过夜。

l 不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。

l 亲和柱于2-8℃冷藏保存，不可冷冻

l 使用前，免疫亲和层析柱需回至室温（22~25℃）

6 操作流程（符合GB/T 18979-2003国标方法）

l 粉碎好的样品过20目筛并在取样前彻底混合，不立即分析的样品应放在冰箱中储存。

l 称取20g粉碎样品及4g氯化钠，加入100ml 70%甲醇/水。

l 高速均质约2分钟，或震荡器震荡约30分钟，

l 过滤样品至少10ml。

l 取10ml滤液加入20ml水，彻底混合。

l 用玻璃纤维滤纸过滤至澄清，取15ml准备加入到免疫亲和柱中过柱。

l 将10ml注射器连接于免疫亲和柱上端。

l 处理好的样品液15ml以1-2滴/秒的速度通过免疫亲和柱，弃掉流出的液体。

l 加10ml水淋洗柱子两次，弃掉流出的液体，

l 利用真空设备压入空气或用注射器吹干柱子中的水。

l 加入1ml甲醇缓慢洗脱，流速约为2-3秒每滴。

l 收集全部洗脱液于干净的比色皿或其他容器中用于检测。

7 操作流程图

8 液相色谱测定条件

● 激发/发射波长：360nm/440nm

● 流动相：甲醇-水（45+55）

● 流速：0.8mL/min

● 进样量：20ul 

● 柱温：30°C 

● 反应时间：10min

用进样器吸取20µL黄曲霉毒素标准工作液注入HPLC

色谱仪，在上述色谱条件下测定标准溶液的响

应值（峰高或峰面积），得到黄曲霉毒素B1、B2、 

G1、G2标准溶液HPLC色谱图