【用途】

本产品为重组慢病毒包装辅助质粒混合物，爱康得将慢病毒包装所需的元件分别置于多个不同的质粒中，大幅度降低重组慢病毒重组为具有复制能力病毒的概率，相对于常规的第三代慢病毒包装系统更进一步提高了生物安全性；同时对各个质粒的比例进行了优化，大幅度提高重组病毒的产出率。

【组成】

本产品为混合质粒，含有重组慢病毒包装所必须的元件。本产品附赠的Lenti-GFP为对照质粒，可以结合Lentivirus packaging mix和Lenti-GFP制备对照慢病毒。

【使用方法】

1. 准备15cm细胞培养皿，接种5*106个细胞/皿，加入完全培养基（DMEM高糖、10%FBS），置于37°C、5% CO2培养箱，过夜培养。

2.  从冰箱中取出转染试剂LVTransm及慢病毒包装质粒（Lenti-GOI、Lenti-Mix），室温解冻后，用移液枪上下吹打完全混匀。取出PBS或HBSS缓冲液，温热至室温。取2mL PBS至6孔板的一个孔，分别加入20μg Lenti-GOI、30μL Lenti-Mix，移液枪上下吹打充分混匀后，加入50μL LVTransm，立即用移液器上下吹打混匀，室温下静置10-15分钟。

3. 将上述转染复合物逐滴加入到15cm培养皿中，轻轻晃动培养皿，充分混匀。将培养皿置于37°C、5% CO2培养箱，培养6~8小时后，将含有转染试剂的培养基去掉，更换为新鲜的完全培养基，将培养皿重新放回培养箱中继续培养。

4. 连续培养24小时后，收集培养皿中含有病毒的培养基上清至一个50mL离心管中；向培养皿内重新加入25mL左右新鲜的完全培养基，继续培养24小时；

5. 收集培养皿中含有病毒的培养基上清至50mL离心管中；向培养皿内重新加入25mL左右新鲜的完全培养基，继续培养24小时；

6. 收集培养皿中含有病毒的培养基上清，并与前面收集的两次培养基上清混合；

7. 用0.45um的PES材质滤膜将过滤后，将滤液转至无菌离心管中，配平后，50000 xg 4°C离心2小时。离心结束后，在生物安全柜中，小心将离心管中的液体吸去，加入400ul PBS缓冲液将沉淀重悬，将病毒置于-80°C保存。