细胞活力检测

细胞活力是一个群体中健康活细胞比例的指标，反映的是细胞健康的总体情况。细胞活力的测定旨在评估细胞的物理和代谢状态，以确定治疗或培养条件对细胞稳态的影响；通常采用CCK-8、MTT等方法进行检测。

 

1．实验原理

CCK-8是一种基于WST-8[2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐]而广泛应用于测定细胞增殖或细胞毒性的一种高灵敏度、无放射性的比色检测方法。其原理是WST-8在电子载体作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye），生成的甲瓒产物的数量与活细胞的数量成正比；细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。

 

2．实验原理图

 

2．实验步骤

2.1 细胞铺板处理

2.1.1 先将14个多孔材料置于基础培养基中浸泡 60 min；

2.1.2 0.25%胰酶37 ℃消化，细胞计数，调整细胞浓度为5x10⁴个/μL；

2.1.3 浸泡完成后置于24孔超低贴附培养板中，每个支架滴加100 μL细胞悬液，静置 30 min；

2.1.4 再用移液器将培养孔内残余的培养液吸出并再次滴加在多孔支架上，重复 4次，使细胞可以充分均匀的粘附在多孔支架内；

2.1.5 接种完成之后将培养板置于培养箱中预培养2 h，等待细胞初步粘附；

2.1.6 每孔再次添加基础培养基没过材料置于培养箱中培养。

2.2 CCK8检测细胞活力

2.2.1 细胞接种1 d，4 d，7 d时向24孔板中每个孔中加入CCK-8溶液；

2.2.2 将培养板置37 ℃培养箱孵育1 h；

2.2.3 完成后，将反应液转移至96孔板中；

2.2.4 酶标仪设定450 nm后检测吸光度，记录数据。

3．实验结果示例

不同血清浓度培养条件下OD₄₅₀检测结果

组别	细胞悬液体积/μL	血清浓度/%	OD450
A	200	10	1.91±0.39
B	100	10	1.75±0.06
C	100	5	1.51±0.10
D	50	5	1.23±0.19

 

参考文献

[1] A simple colorimetric method for viable bacteria detection based on cell counting Kit-8[J]. Analytical Methods, 2021, 13.

[2] Shengli, Pan, Yingying, et al. TRIM52 promotes colorectal cancer cell proliferation through the STAT3 signaling.[J]. Cancer Cell International, 2019.

[3] Roslev P,  King G M . Application of a Tetrazolium Salt with a Water-Soluble Formazan as an Indicator of Viability in Respiring Bacteria[J]. Applied & Environmental Microbiology, 1993, 59(9):2891-6.

[4] 熊建文,肖化,张镇西.MTT法和CCK-8法检测细胞活性之测试条件比较[J].激光生物学报,2007(05):559-562.

[5] 侯春梅,李新颖,叶伟亮,曹曦元,肖鹤,黎燕.MTT法和CCK-8法检测悬浮细胞增殖的比较[J].军事医学科学院院刊,2009,33(04):400-401.

 

SEO信息标题:细胞实验_细胞活力_ CCK-8_MTT_唯问生物Justscience

SEO关键词：细胞实验,细胞活力,CCK-8,MTT,唯问生物Justscience

SEO说明： 不同的细胞实验可检测细胞各方面的功能和状态；细胞活力可检测细胞健康状态，其检测方法通常是CCK-8和MTT法，唯问生物Justscience可协助广大科研工作者完成细胞活力检测实验，交付可重复实验结果。