操作步骤

1. 使用移液管（枪）吸取15ml淋巴细胞分离液注到50ml分离管下室（15ml分离管吸取4ml）。

注意 : 请用移液管直接将淋巴细胞分离液通过隔板小孔注到分离管下室，勿将分离液置于分离管上室，否则分离液难以流至下室，影响后续分离操作。

2. 在50ml分离管中倒入15-30ml稀释血液样品（15ml分离管倒入3-8ml），亦可直接在分离管中倒入平衡盐溶液进行稀释。

3. 在800g条件下离心10分钟。

4. 离心后，管内样品从上往下分层如下：血浆-单核细胞-分离液-隔层-分离液-红细胞。

5. 直接将隔板上层液体快速倾倒入另一无菌离心管中(有少许红细胞贴于隔层上方为正常现象,因其离心后贴壁不会随上层液体倾倒出来)。

注意 : 倾倒隔板上层液体时需迅速，且一次性完成，勿反复倾倒。

6. 加入15ml PBS, 用移液管重悬清洗细胞。室温300g离心5分钟。

7. 重复第6步一到两次，获得单个核细胞可以冻存或进行下游分析和培养。