产品概述

为确保产品的性能和无忧的操作，使用前请仔细阅读本手册，有任何疑问请咨询本公司技术支持或当地的销售人员。

Q Focurose HPR是高耐压的强阴离子交换介质，适用于蛋白、多肽、核酸等所有带电的生物分子的分离纯化。小颗粒设计，多应用样品的精细纯化。

 

1 产品介绍

特点：

a.高耐压。

b.高分辨率。

c.高化学耐受性。

d.便于维护。

 

表1：Q Focurose HPR 性能参数

基质	高刚性琼脂糖
粒径范围	25-45µm
平均粒径	35±5µm
介质类型	强阴离子交换
带电基团	-N+(CH3)3
离子载量	0.13-0.16mmol Cl-/ml介质
操作压力	≤0.5MPa
流速	≥150cm/h
pH稳定性	2-12（工作）/2-12（长期）/ 2-14（短期）
化学稳定性	常用缓冲液、1.0M氢氧化钠、8M 尿素、6M 盐酸胍、70%乙醇
避免使用	氧化剂、阴离子型去污剂、阴离子型缓冲液
贮存溶液	20%乙醇
贮存温度	4-30℃

 

 

2 选择指导

2.1 离子交换介质的选择

图1：离子交换介质的选择

说明：

a.当目标物所在溶液的pH˂目标物的等电点时，选择阳离子交换介质。

b.当目标物所在溶液的pH˃目标物的等电点时，选择阴离子交换介质。

c.所使用溶液的pH应该在离子交换介质的使用pH范围以内。

2.2 缓冲溶液的选择

表2：阴离子交换缓冲液

pH范围	缓冲盐	浓度（mM）	平衡离子	pKa(25℃)
4.3-5.3	N-Methylpiperazine	20	Cl-	4.75
4.8-5.8	Piperazine	20	Cl-或HCOO-	5.33
5.5-6.5	L-Histidine	20	Cl-	6.04
6.0-7.0	bis-Tris	20	Cl-	6.48
6.2-7.2	bis-Tris propane	20	Cl-	6.65
7.3-8.3	Triethanolamine	20	Cl-或CH3COO-	7.76
7.6-8.6	Tris	20	Cl-	8.07
8.0-9.0	N-Methyl-diethanolamine	20	SO42-	8.52
8.0-9.0	N-Methyl-diethanolamine	50	Cl-或CH3COO-	8.52
8.4-9.4	Diethanolamine	50	Cl-	8.88
8.4-9.4	Propane 1,3-Diamino	20	Cl-	8.88
8.6-9.6	bis-Tris propane	20	Cl-	9.10
9.0-10.0	Ethanolamine	20	Cl-	9.50
9.2-10.2	Piperazine	20	Cl-	9.73
10.0-11.0	Propane 1,3-Diamino	20	Cl-	10.55
10.6-11.6	Piperidine	20	Cl-	11.12

 

表3：阳离子交换缓冲液

pH范围	缓冲盐	浓度（mM）	平衡离子	pKa(25℃)
1.4-2.4	Maleic acid	20	Na+	1.92
2.6-3.6	Methyl malonic acid	20	Na+或Li+	3.07
2.6-3.6	Citric acid	20	Na+	3.13
3.3-4.3	Lactic acid	50	Na+	3.86
3.3-4.3	Formic acid	50	Na+或Li+	3.75
3.7-4.7	Succinic acid	50	Na+	4.21
4.3-5.3	Acetic acid	50	Na+或Li+	4.75
5.1-6.1	Succinic acid	50	Na+	5.64
5.2-6.2	Methyl malonic acid	50	Na+或Li+	5.76
5.6-6.6	MES	50	Na+或Li+	6.27
6.7-7.7	Phosphate	50	Na+	7.20
7.0-8.0	HEPES	50	Na+或Li+	7.56
7.8-8.8	BICINE	50	Na+	8.33

 

说明：

a.按照表2和表3选择缓冲溶液的种类和浓度。

b.错误的缓冲液（种类和浓度）会干扰分离效果(如分离度、载量、pH波动等)。

c.所使用缓冲液的pH应该在离子交换介质的使用pH范围内。

d.使用分析纯或者更高纯度的缓冲液。

e.在溶液配制后，须经过滤（平均粒径<45µm，用0.22µm过滤；45µm<平均粒径<165µm，用0.45µm过滤；平均粒径>165µm，用0.8µm过滤）和脱气处理（超声或负压）。

 

3 样品的制备

样品所在溶液要和平衡液保持一致，可以用平衡液稀释或透析/超滤/G25进行缓冲液置换。

样品过滤（平均粒径<45µm，用0.22µm过滤；45µm<平均粒径<165µm，用0.45µm过滤；平均粒径>165µm，用   0.8µm过滤）。

 

4 纯化流程（以XK16/10为例）

采用液滴对液滴（避免引入气泡）的方式将柱子连接到层析系统上。

用平衡液以5ml/min的流速冲洗5CV（CV指柱床体积，下同）。

用洗脱液以5ml/min的流速冲洗5CV。

用平衡液以5ml/min的流速冲洗10CV。

将样品以5ml/min的流速上样。

用平衡液以5ml/min的流速冲洗10CV。

用洗脱液以5ml/min洗脱5CV或20CV(根据前期筛选实验数据，采用阶梯式洗脱5CV/线性梯度洗脱20CV)。

用再生液以5ml/min的流速冲洗5CV。

备注：再生液=平衡液+1M NaCl，其它组分不变。

 

5 放大

保持柱床高度不变

5.2 保持线性流速不变

备注：若实际情况和实验室数据有偏差，可以维持停留时间不变。

 

6 维护

6.1平衡

柱子装填完成后，用平衡液以60cm/h的流速冲洗5CV或冲洗至电导和pH值恒定。

6.2再生

每次分离纯化后，用再生液以60cm/h的流速冲洗5CV或冲洗至电导和pH值恒定。

6.3在位清洗

在位清洗用于清洗再生没有清洗干净的物质，例如脂类、沉淀物、变性蛋白。

a.强离子结合蛋白

用2.0M NaCl以60cm/h的流速反向冲洗5CV。

b.沉淀物、疏水结合蛋白、脂蛋白

用1.0M NaOH以30cm/h的流速反向冲洗5CV。

c.脂类、强疏水蛋白。

用1.0M NaOH，30%异丙醇以30cm/h的流速反向冲洗5CV

6.4消毒

用1.0M NaOH以30cm/h的流速反向冲洗5CV。

6.5灭菌

将介质置换到0.5M NaCl ,pH 7.0的溶液中进行高压灭菌。

6.6保存

介质在20%乙醇中4-30℃保存。

 

7 订购信息

表4：订购信息表

产品	规格	货号
Q Focurose HPR	25ml	HL190306025M
Q Focurose HPR	100ml	HL190306100M
Q Focurose HPR	500ml	HL190306500M
Q Focurose HPR	1L	HL190306001L
Q Focurose HPR	5L	HL190306005L
Q Focurose HPR	20L	HL190306020L

备注：大规格包装产品或其它产品购买，请咨询本公司当地销售或售前技术支持。