PEG诱导细胞融合试剂盒
产品货号：T10195
产品规格：50T/100T
产品简介：
细胞融合(cellfusion)是两个或两个以上细胞融合并形成一个细胞过程。在自然情况下，体内、体外发生的细
胞融合的现象称为自然融合；体外培养的细胞可用人工方法诱导相同或者不同细胞间发生融合，称为人工诱导融
合。体外培养的单层贴壁细胞或悬浮细胞均可以做融合，但成功概率较大的是单层贴壁细胞。
PEG诱导细胞融合试剂盒主要由PEG诱导溶液、HAT、HT、AMediaSupplement等组成，其作用原理使能够
改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，两细胞接口处在双分子层质膜的相
互亲和以及彼此的表面张力作用下，细胞发生融合。获得生产单克隆抗体的杂交瘤细胞，诱导细胞杂交，该试剂
经严格无菌处理，仅用于科研领域，不用于临床诊断或治疗。
产品组成：
试剂盒内容50T100T保存条件
试剂(A):PEG诱导溶液100ml200ml4℃
试剂(B):HATMediaSupplement(50×)10ml20ml-20℃
自备材料：
1.MEM培养基、胎牛血清
2.CO2培养箱、离心机
3.HATMediaSupplement
4.胰蛋白酶消化液
操作步骤(仅供参考)：
1.如果变成胶冻状，可37~60℃水浴使其变成溶液。
2.单层贴壁细胞：将杂交前体细胞以相同数量接种，以适当的培养基培养细胞，待细胞贴壁扩展至汇合成片的
密度。吸干培养液，加入PEG诱导溶液，轻轻转动1min使PEG诱导溶液覆盖所有细胞。静置1min，加入
完全MEM培养液以稀释PEG诱导溶液，吸干净稀释的PEG诱导溶液，再用MEM培养液洗涤被PEG处理
的细胞。吸干净洗液，加入MEM培养液，37℃5%CO2培养过夜。24~48h后先吸去培养液，加入胰酶消化
液处理细胞，待细胞消化后吸除胰酶消化液，用HAT选择培养液（按HATMediaSupplement：含胎牛血清
的RPMI1640培养液=1：49配制）培养剔除HPRT和TK缺陷细胞。融合后进行异核体分析，杂交前体细
胞在4~5天内发生死亡，对于大多数融合前体细胞而言，10~14天可见杂交细胞克隆。
3.悬浮细胞：将两种不同亲体的细胞各（约为1×10
7）混匀，800g离心以沉淀杂交前体细胞，弃上清液，使之
剩余约，手指轻弹管底或手摇离心管使两种细胞混匀并重新悬浮。在离心管中加入PEG诱导溶液(50%,无菌)，
置于37℃水浴2min，加入5ml提前37℃预热的含10%胎牛血清的MEM培养液，使PEG1000稀释并停止
作用。1000g离心5min，弃上清液，加入5ml完全MEM培养液以稀释PEG诱导溶液，吸干净稀释的PEG
诱导溶液。用5ml无血清MEM培养液，手摇离心管重悬细胞(不要破坏细胞)，1000g离心5min，弃上清液，
重复1次该步骤。加入含有20%的胎牛血清的HAT选择培养液，混匀，将细胞悬液用培养液稀释至，接种
于96孔板或其他器皿中，37℃5%CO2孵育过夜24~48h后选出融合细胞。
注意事项：
1.应注意无菌操作，避免被微生物污染。
2.PEG诱导溶液较为粘稠时，可37~60℃水浴使其变成溶液。
3.体外培养的单层贴壁细胞或悬浮细胞均可做融合，但成功概率较大的是单层贴壁细胞。
有效期：6个月有效。