CelGreen(10000*)核酸染料

货号：CG001

储存条件：  4℃避光可保存12个月。

CelGreen核酸染料特点

 ●无毒性：CelGreen独特的油性和大分子量特点使其不能穿透细胞膜进入细胞内，艾姆斯氏试验结果也表明，该染料的诱变性远远小于EB。

●灵敏度高：适用于各种大小片段的电泳染色，对核酸迁移的影响小于SYBR Green I。

 ●稳定性高：适用于使用微波或其它加热方法制备琼脂糖凝胶；室温下在酸或碱缓冲液中极其稳定，耐光性强。

●信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低。

 ●操作简单：与EB一样，在预制胶和电泳过程中染料不降解；而电泳后染色过程也只需30分钟且无需脱色或冲洗 ，即可直接用紫外凝胶透射仪观察。

 ●适用范围广：可选择电泳前染色（胶染法）或电泳后染色（泡染法）；适用于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳；可用于 dsDNA、ssDNA 或 RNA 染色。

●在480nm可见光附近可得到最佳激发。

 

CelGreen使用方法简介

1．胶染法（用法同EB）（推荐方法）

    （1）制胶时加入CelGreen 核酸染料（例如：每50mL 琼脂糖溶液中加入5μL CelGreen 10,000× 储液，以此比例类推）。

（2）按照常规方法进行电泳。

注意事项：

u此方法染色染料用量相对较少。500 μL染料大约可以做100块 50mL的胶。

  u由于CelGreen具有良好的热稳定性，可以在热的琼脂糖溶液中直接添加，而不需要等待溶液冷却。摇晃，振荡或者翻转以保证染料充分混匀。也可以选择将CelGreen储液加到琼脂糖粉末 和电泳缓冲液中，然后用微波炉或其他常用方式加热以制备琼脂糖凝胶。CelGreen兼容所有常用的电泳缓冲溶液。

  u如果总是看到条带弥散或分离不理想，建议使用泡染法染色以确认问题是否与染料有关。如果染色后问题依旧存在，则说明问题与染料无关，请尝试：降低琼脂糖浓度；选用更长的凝胶；延长凝胶时间以保证边缘清晰；改进上样技巧或选择泡染法染色。

u此方法不适合预制聚丙烯酰胺凝胶，对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法。

2．泡染法

（1）按照常规方法进行电泳。

（2）用H2O将CelGreen 10,000× 储液稀释约3,300倍到0.1M NaCl中，制成3× 染色液（例如将15μL CelGreen 10,000× 储液和5mL 1M NaCl加到45mL H2O中）。

（3）将凝胶小心地放入合适的容器中，如聚丙烯容器中。缓慢加入足量的3× 染色液浸没凝胶。室温振荡染色30min左右，最佳染色时间根据凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同而略有不同。对 于含3.5～10%丙烯酰胺的凝胶，染色时间通常介于30min到1h，并随丙烯酰胺含量增加而延长。

（4）用 480nm 可见光系统观察结果。

注意事项：

u用泡染法染色时，染料用量较多。单次使用的染色液可重复使用3次左右。

u3 × CelGreen染色液可以大量制备，在室温下避光保存直至用完。

3．核酸电泳的PAGE步骤：

（1）将TBE制备的凝胶放入电泳槽中，用夹子夹住边缘。

（2）用配置凝胶溶液同一批次的5×TBE灌满缓冲液槽。用注射器排除凝胶底部的气泡。

（3）用注射器吸取1×TBE冲洗加样孔。将DNA样品和适量的6×凝胶上样缓冲液混合，用微量移液管加入加样孔。

（4）将电极与电源相连（正极接下槽），打开电源一般90V；1～8V/cm。进行电泳9h。

（5）电泳至标准参照染料迁移至所需位置（一般是电泳到二甲苯完全迁出，溴酚蓝距底边2～3cm停止）。关闭电源，拔掉插头，弃去电泳槽中的电泳液。

（6）将凝胶取下来放入，染色皿中，加3XCelGreen的1X缓冲液中的振荡染色30-60分，放置在紫外检测即可。

 

注意事项：

PAGE胶与琼酯糖凝胶不同，不能用预染或点染的方法；只能用泡染的方法显色，由于聚丙

烯酰胺比较致密，染料不容易深入，显色效果没有琼酯糖凝胶好。

特别提醒：

如果您使用的是紫外成像仪，请选择CelRed；如果您使用激光成像仪或希望在可见光下观测，请选择CelGreen。

在极少数情况下，质粒经某些酶切后的DNA样品会出现拖尾和分辨率降低，此时建议同时尝试两种染色方法以决定哪种方法更加合适。