产品描述

MSCgo™Adipogenic Differentiation Medium间充质干细胞成脂诱导分化培养基，无血清，无异源成分，即用型，适用于不同来源的hMSC，如骨髓、脂肪组织和脐带组织（hMSC-BM，hMSC-AT，hMSC-CT）。

 

成脂结果

成脂分化后的hMSC会成球状，并且伴随有脂滴累积，该现象可透过倒置显微镜观察。不同的细胞来源 (类型、年龄、代数)所得到的分化细胞数会有差异。

 

培养基组成

MSCgo™间质干细胞成脂诱导分化培养基

产品描述	储存	货号	规格
MSCgo™ Adipogenic Differentiation Basal Medium	2-8°C	05-330-1B	100ml
MSCgo™ AdipogenicSF,XF Supplement Mix I	-20°C	05-331-1-01	0.1ml
MSCgo™ AdipogenicSF,XF Supplement Mix II	-20°C	05-332-1-15	1.5ml

 

完全分化培养基配制

1         室温下解冻2个Supplement Mix。

2         将0.1ml Supplement Mix I与 1.5ml Supplement Mix II 加入到100ml Adipogenic Basal Medium 中，于2-8°C储存。

3         完全培养基可在2-8°C储存一个月。

 

成脂实验所需材料

维持培养基

MSC NutriStem® XF Medium: BI；05-200-1，05-201-1  

ž 注：若您有MSC血清或者其他培养试剂也可使用。

MSC Attachment solution XF : BI；05-752-1

 

 

分化培养基

MSCgo™ Adipogenic Differentiation Medium：05-330-1 ，05-331-1，05-332-1

 

染色试剂（可选）

Oil Red O，Sigma；O0625。建议选择Vivacell品牌，间充质干细胞成脂分化染色试剂盒，货号：C37A0-0150。

 

成脂诱导分化操作

以维持培养基接种hMSC

1         用MSC Attachment solution (BI；P/N: 05-752-1，1:100 DPBS 稀释) 预包被24孔盘，每孔加入0.5ml MSC NutriStem^® XF，接种6x10⁴细胞（3x10⁴ cells/cm²）。

ž 此处仅为针对成脂诱导的细胞接种操作，MSC NutriStem^® XF Medium详细操作步骤请参考其说明书。

2         置于37°C，5% CO₂细胞培养箱中培养。

 

以成脂分化培养基诱导分化

1         培养24h后确认细胞融合度达到80-90%，将维持培养基吸除，每孔（24孔盘）加入0.5ml分化培养基。

ž 注：若细胞融合度<80%，继续再培养一天。

2         置于37°C，5% CO₂细胞培养箱中培养14-21天，期间培养基的换液请参照以下建议。

 

不同hMSC类型的培养基换液方法

不同来源的hMSC具有不同的多向分化潜能。例如，hMSC-AT所需的诱导期较短 (~ 6天)，而hMSC-BM和hMSC-CT则需要约10天的诱导期。

ž 不同来源干细胞有不同建议，请参考下面说明。

ž 由于脂肪细胞是脆弱的，移液要非常小心，避免将液体直接加到脂肪细胞上。

ž 细胞诱导完成后，使用维持培养基培养。

 

hMSC-AT（脂肪来源）:

一个分化周期/分化培养基 ->维持培养基

l  使用完全分化培养基培养6-8天，期间每3-4天换液。

l  分化完成后，换液成维持培养基，继续培养3-4天。

l  观察到成熟脂肪细胞（即脂滴的形成），即可染色。
    

hMSC-BM（骨髓来源）：

一个分化周期/分化培养基 ->维持培养基

l  使用完全分化培养基培养8-12天，期间每3-4天换液。

l  分化完成后，换液成维持培养基，继续培养3-4天。

l观察到成熟脂肪细胞（即脂滴的形成），即可染色。

  

 

hMSC-CT（脐带来源）：

至少两个分化周期/分化培养基 ->维持培养基

l  使用完全分化培养基培养5-10天，期间每3-4天换液。

l  分化期间，若细胞开始变圆、不贴壁，换液成维持培养基，培养3-6天，每2-4天换液。

l 再重复诱导分化步骤，直到观察到成熟脂肪细胞（即脂滴的形成），即可染色。