抗体是由免疫B细胞受到抗原刺激产生的能够特异性的和抗原结合的生物蛋白质分子。由于其能够高特异性，高亲和的结合抗原，抗体广泛应用在学术研究、疾病诊断以及医学药物各个方面。

传统抗体分子(IgG)是一种结构相当保守的由两条相同的重链和两条相同的轻链组成的蛋白分子。抗体的轻链包含1个可变区和1个恒定区，即VL和CL。而重链则拥有1个可变区和3个恒定区，即VH、CH1、CH2和CH3。VH区和VL区共同组成传统抗体识别抗原的最小单位，抗体可变区的序列差异决定了抗体能够特异地识别不同的抗原。而CL区和CH区则相对保守，被称为抗体的恒定区，其中CH区的CH2和CH3两个区域对于抗体招募免疫细胞发挥ADCC和CDC功能有着重要的作用。

重链抗体为驼类和软骨鱼类中天然存在的仅由两条重链组成的特殊抗体，包含一个重链可变区（VHH, Variable domain of heavy chain antibody）和两个常规的CH2与CH3区，CH1区天然缺失。重链抗体通过重链上的一个可变区（VHH）结合抗原，该可变区可以单独稳定地在体外存在，被称为驼类单域抗体(SdAb)或者纳米抗体（Nanobody）。纳米抗体晶体直径为2.5nm，长约4nm，分子量仅为传统完整抗体的1/10（约15kD）但依然具有完整的抗原识别能力。

和传统抗体相比，纳米抗体分子量小，亲水性佳，并且可以通过大肠杆菌进行体外重组表达进行大量生产，有效避免传统抗体的批次间差异问题。得益于以上特征，使得纳米抗体在新药物发现方面具有一系列优势，表现出极大的潜力：

（1）可以结合传统抗体结合不到的的位点，和靶点结合特异性更强；

（2）组织穿透力更高；

（3）更高的稳定性；

（4）适合工业化大规模生产；

（5）更容易改造和优化；

（6）更容易人源化

由于纳米抗体的这些特征，越来越多的研究机构和药物生产企业在不同的场景中关注、尝试使用纳米抗体。而纳米抗体的开发不同于传统单克隆抗体通过杂交瘤制备的方法，它一般通过免疫羊驼、构建噬菌体文库和通过噬菌体展示来筛选出候选纳米抗体，再通过纳米抗体表达和纯化后进行与抗原是否结合的验证实验。下面，我们将详细讲述筛选制备纳米抗体的流程以及其中的关键点和操作技巧，其中的每一个步骤均由深圳康体生命经过多次优化和总结，供有需要和想尝试纳米抗体筛选的机构参考。

免疫羊驼筛选单域抗体：

获得单域抗体的普遍方法是羊驼经过抗原免疫后通过体内免疫系统的作用使得抗体成熟，分离羊驼外周血B淋巴细胞，提取RNA，反转录获取cDNA，以cDNA为底物PCR扩增获取多样化纳米抗体基因片段，然后将多样化纳米抗体基因片段连接到噬菌粒上，构建噬菌体库。然后通过噬菌体展示和筛选技术从羊驼抗体库中筛选得到适合的候选纳米抗体并对其进行验证。整个流程主要包括羊驼免疫、噬菌体文库构建、抗体筛选、表达纯化及验证等阶段。

总结：免疫一只空白适龄羊驼（1-3岁），免疫四次，两周免疫一次，免疫完了抽50ml的pbmc外周血，ELisa检测血清滴度要大于10^5；然后构建噬菌体文库，建库的标准是10^8以上；抗体筛选，可以保证提供20条以上的阳性克隆序列。