基因组DNA提取服务
- CTCC-DNA提取
- CTCC
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- 2022-07-29 14:11:31
无锡菩禾生物医药技术有限公司
基因组DNA提取
从新鲜组织、血液、细胞、细菌等多种材料中提取基因组DNA,不同种类的材料中提取的基因组DNA量不同,而且差异也比较大,一般材料的基因组DNA提取情况如下:
材料种类 | 样品要求 | 起始量 | 收量 |
血液 | 新鲜血液及抗凝剂处理的全血 | 100 μl | 1 μg左右 |
培养细胞 | 离心收集的细胞 | 1×106 | 10 μg左右 |
动物组织 | 一般材料 | 100 mg | 5~10 μg |
植物 | 一般材料 | 100 mg | 5~10 μg |
细菌 | 菌悬液或离心收集后的菌体 | 1×108 | 1~2 μg |
实验步骤
1、贴壁细胞用胰酶消化,离心收集。
2、细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次,离心收集。
3、重复2。
4、加入5ml DNA提取缓冲液,(10m mol/L Tris-cl,0.1 mol/L EDTA,0.5% SDS),混匀。
5、加入25ul 蛋白酶K,使终浓度达到100ug/ml,混匀,50℃水浴3h。
6、用等体积的酚抽提一次,2500r/min 离心收集水相。用等体积的(酚,氯仿,*戊醇)混合物抽提一次,2500r/min 离心收集水相。
用等体积的氯仿,*戊*抽提一次。
7、加入等体积的5mol/L 的LiCL,混匀,冰浴,10min。
8、2500r/min,离心10min. 转上清与一离心管中。加入等体积的异丙醇。室温10分钟。
9、2500r/min,离心10min。弃上清。加入0.1倍 体积3mol/L 乙酸钠(PH5.2)与2倍体积-20℃预冷无水乙醇。-20℃ 20分钟。
10、12000r/min, 室温离心5分钟。弃上清。将DNA溶于适量TE中。
实验完成周期及交付标准:
1.实验周期: 1周
2.交付标准:基因组DNA、完整实验报告(电泳照片、OD值测定结果等)
需确认的信息(客户提供):
1.新鲜材料或正确保存条件下材料(组织、细胞、细莹等)
2.4°C保存一周,-20°C保存一个月, -80°C保存一年血液样品 (EDTA,肝素,柠檬酸钠抗凝)
3.详细的背景资料:来源、特点类型等