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Taq 酶(Taq DNA Polymerase)
- 8004250
- 杭州新景(SIMGEN)
- 浙江省杭州市
- 现货
- 250μl
- 400 元
- 2022-07-07 08:36:54
杭州新景生物试剂开发有限公司
产品简介
本制品是94KD的耐热的DNA聚合酶。是把ThermusaquaticusDNA Polymerase的基因经过克隆转化到大肠杆菌中进行表达后,分离提取而得到的。它与天然Taq DNA聚合酶具有相同的功能。该酶反应需Mg2+参与,它以双链DNA为模板催化核苷酸从5’向3’末端形成双链DNA。该酶同时具有5’→3’核酸外切酶活性。
运输及保存
低温运输、-20℃保存,有效期大于两年。
单位定义
74℃,30min,使10 nm dNTP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活力单位。
活性检测条件:50 mM Tris-Hcl(pH 9.0, 25℃),50 mM NaCl, 5 mM MgCl2,0.2 mM each dNTPs(包括[3H]-Dttp), 200 μg/ml 活化的小牛胸腺DNA和0.1 mg/ml BSA。
质量控制
SDS-PAGE 检测纯度大于99%。经检测无外源核酸酶活性,PCR方法检测无宿主DNA残留,能有效扩增人类基因组中的单拷贝基因。
PCR体系成分
1. 模板DNA的纯度:很多残留的核酸提取试剂会影响PCR反应,包括蛋白酶、蛋白变性剂(比如SDS、胍盐)、高浓度盐(KAc、NaAc、辛酸钠等)和高浓度EDTA等。纯度不高的模板(比如煮沸法获取的模板)用量请勿超过PCR反应体系的1/10(比如50 μl反应体系中加入模板的体积不应超过5μl)。如果模板DNA纯度太差,可使用新景(Simgen)PCR清洁试剂盒(Cat. No.2101050)对模板DNA进行纯化及浓缩。经新景(Simgen)PCR清洁试剂盒纯化后的模板使用量可多至PCR反应体系体积的1/2。
2. 模板DNA用量:极微量的DNA也可以作为PCR摸板,但为保证反应的稳定性,50μl体系建议使用104拷贝以上的靶序列作为模板。模板 DNA 的推荐使用量:
人基因组 DNA:0.05 μg~0.5 μg/50 μl PCR反应体系
大肠杆菌基因组 DNA:10 ng~100 ng/50 μl PCR反应体系
λ DNA:0.5 ng~5 ng/50 μl PCR反应体系
质粒DNA: 0.1ng ~ 10 ng/50 μl PCR反应体系
如需用扩增产物作为模板再扩增,应至少将扩增产物稀释1,000至10,000倍后再作为模板使用,否则可能会出现涂抹条带或无特异性条带。
3. 引物浓度:一般每条引物配制的浓度为10 μM (50×),工作浓度为0.2 μM。引物过量可能会出现非特异性扩增,引物过少则可能会降低扩增效率。