噬菌体展示技术服务平台

   M13单链丝状噬菌体展示系统是目前应用最广泛的文库展示系统，通过将蛋白、抗体或多肽与噬菌体pIII蛋白融合表达，使之参与噬菌体组装，并展示在噬菌体表面，形成噬菌体展示文库。使用噬菌体展示文库，针对特定靶分子进行3-5轮亲和筛选，可以富集能特异性结合靶分子的噬菌体，得到相应的 DNA序列信息。

　　艾柏森生物目前开发的噬菌体展示技术服务平台涵盖了免疫抗体库、天然抗体库等常用的文库类型，可根据客户的特殊需求定制个性化文库，并提供灵活高效的筛选服务。

噬菌体展示服务简介

   M13单链丝状噬菌体展示系统是目前应用最广泛的文库展示系统，通过将蛋白、抗体或多肽与噬菌体pIII蛋白融合表达，使之参与噬菌体组装，并展示在噬菌体表面，形成噬菌体展示文库。使用噬菌体展示文库，针对特定靶分子进行3-5轮亲和筛选，可以富集能特异性结合靶分子的噬菌体，得到相应的 DNA序列信息。

　　艾柏森生物目前开发的噬菌体展示技术服务平台涵盖了免疫抗体库、天然抗体库等常用的文库类型，可根据客户的特殊需求定制个性化文库，并提供灵活高效的筛选服务。

 

艾柏森生物平台系统主要包括pComb3噬菌体展示系统和pCANTAB5e噬菌体展示系统:

★  pComb3噬菌体展示技术流程

1>  抗体基因库的获得：收集目标抗体宿主的免疫细胞，提取细胞总RNA；反转录后，使用多对引物分别扩增VH-CH1抗体基因片段和VL-CL1抗体基因片段；

2>  抗体基因库转化大肠杆菌：将以上扩增的抗体基因库连接至pComb3质粒，随后电转化大肠杆菌XL12 Blue；同时鉴定基因库库容（及抗体基因的插入率）；

3>  噬菌体Fab抗体库的构建：将辅助噬菌体VCSM13加入到转入了抗体基因的，生长至对数生长期的大肠杆菌中进行噬菌粒拯救；培养过夜后，离心收集上清即获得噬菌体Fab抗体库；

4>  抗体库的滴度测定：取少量上述获得的噬菌体Fab抗体库，梯度稀释后进行噬斑培养实验，观察噬斑生长情况以判断噬菌体Fab抗体库的滴度；

5>  噬菌体抗体库的富集筛选：使用靶标抗原包被酶联板，加入噬菌体抗体进行孵育，随后进行洗板、洗脱；将洗脱下来的噬菌体抗体进行中和后，再次感染细菌，并进行第二轮的淘洗；共进行3轮淘洗，每一轮洗脱后都进行滴度测定；最后一轮筛选时，设BSA包被的对照组以确定是否富集了大量抗BSA的噬菌体抗体。

 

图1 pComb3噬菌体展示技术流程

 

 

图2 噬菌粒载体pComb3遗传图谱

 

 

图3 辅助噬菌体VCSM13遗传图谱

★  pCANTAB5e噬菌体展示技术流程

1>  ScFv基因库的获得：收集目标抗体宿主的免疫细胞，提取细胞总RNA；反转录后，使用多对引物分别扩增抗体基因VH和VL，纯化回收VH和VL片段后，使用Linker引物将全套VH和VL基因随机拼接成ScFv基因库；

2>  ScFv基因库转化大肠杆菌：将全套 ScFv 基因片段连接至pCANTAB5e载体，随后电转化大肠杆菌TG1；同时鉴定ScFv基因库库容（及基因的插入率）；

3>  噬菌体ScFv抗体库的构建：将辅助噬菌体M13K07加入到转入了ScFv抗体基因的，生长至对数生长期的大肠杆菌中进行噬菌粒拯救；培养过夜后，离心收集上清即获得噬菌体ScFv抗体库；

4>  抗体库的滴度测定：取少量上述获得的噬菌体ScFv抗体库，梯度稀释后进行噬斑培养实验，观察噬斑生长情况以判断噬菌体ScFv抗体库的滴度；

5>  噬菌体抗体库的富集筛选：使用靶标抗原包被酶联板，加入噬菌体抗体进行孵育，随后进行洗板、洗脱；将洗脱下来的噬菌体抗体进行中和后，再次感染细菌，并进行第二轮的淘洗；共进行3轮淘洗，每一轮洗脱后都进行滴度测定；最后一轮筛选时，设BSA包被的对照组以确定是否富集了大量抗BSA的噬菌体抗体。

 

 

图1 pCANTAB5e噬菌体展示技术流程

 

 

 

图2 噬菌粒载体pCANTAB5e遗传图谱

 

 

图3 辅助噬菌体M13K07遗传图谱

噬菌体展示技术服务项目

表1 噬菌体展示技术服务项目：噬菌体展示抗体库构建

 

服务描述		服务周期	价格
cDNA 合成	免疫细胞收集，总RNA提取，反转录合成cDNA。	1周	¥98000
质粒构建	以以上cDNA为模板,  PCR扩增抗体基因片段，并连接至载体 (例如：pComb3或pCANTAB5e载体) 。	4周
转化	将已构建好的载体电转化至大肠杆菌菌株。	1周
库容鉴定	(1)以上转化菌株复苏后，梯度稀释，并涂布平板，计算阳性克隆数； (2)挑选10个阳性单克隆，提取质粒后，进行酶切验证; (3)通过阳性克隆数和酶切验证的结果，计算抗体库库容。
抗体库生产	通过辅助噬菌粒拯救获得噬菌体展示抗体库。	1周
运输	低温（干冰）运输。	N/A	免费
总计：		2-3月	¥98000
注：项目启动后，客户需支付80%的预付款。