MTT细胞增殖检测试剂盒说明书

概述：

    四唑盐比色试验是一种检测细胞存活和生长的方法.试验所用的显色剂是一种能接受氢原子的染料,化学名3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑嗅盐,商品名是噻唑蓝,简称为MTT。检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶性的蓝紫色结晶物formazan并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide, DMSO）能溶解细胞中的formazan，用酶标仪在490nm波长处测定起光吸收值，可间接反映活细胞量。在一定细胞数范围内，MTT结晶物形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。

操作方法：

1. 细胞毒性检测

  a. 接种细胞：接种对数期的细胞至96孔板，密度约1~5×10³个/孔，每孔100 μl，每组设置3~5个复孔，置于37℃，5% CO₂培养箱；

  b. 样品处理：待细胞贴壁后，加入不用浓度的药物或样品处理细胞，然后置于培养箱中孵育一定的时间（如：24 h、48 h、72 h）；

  c. MTT孵育：每孔加入10 μl的MTT试剂，轻轻混匀，并将培养板置于37℃培养箱中孵育4 h；

  d. 吸去每孔中上清液，加入150 μl DMSO，使其充分溶解formazan；

  d. 上机检测：将孵育后的细胞培养板置于酶标仪上，在570 nm处检测其吸光值；

储存条件

4℃保存，1年有效；-20℃保存，2年以上有效；

仅供科学研究使用