PCR

一、实验原理

PCR 全称聚合酶链式反应（英文：Polymerase chain reaction），是利用DNA双链复制的原理，在生物体外大量扩增特定DNA片段的分子生物学技术，其特点是可以以微量的DNA为模板，快速扩增得到大量拷贝。原理是基于DNA 半保留复制与碱基互补配对原则，是在体外模拟DNA的天然复制过程，主要由‘变性-退火-延伸’这三个基本步骤构成，变性：DNA双链在高温条件（95℃）下解旋形成单链；退火：降低温度可使引物结合到单链DNA上，DNA聚合酶结合到引物上；延伸：DNA 聚合酶在其最适反应温度（72℃）开始沿着DNA链5'-3' 方向合成互补链。随着PCR 的进行，生成的DNA本身将作为模板，从而启动链式反应，原始DNA模板被指数扩增。

 二、实验试剂

Taq酶，M-MLV逆转录酶，dNTPs， DEPC处理水，双蒸水

 三、实验仪器

电泳仪， PCR仪，高速离心机，移液器，电泳仪，电泳槽，紫外分析仪

 四、操作步骤

1．cDNA的合成

逆转录体系的组成：

2．PCR扩增特异性片段

25ul PCR体系的组成：

五、实验注意事项

整个操作始终注意避免RNA酶的污染；

PCR反应灵敏，注意避免试剂污染；

酶易失活，整个操作注意在冰上进行。

设立对照：阳性对照：阳性模板，阴性对照：阴性模板，试剂对照：除模板外的所有组分。

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