产品名称：DEAE-Crystarose HP

　　DEAE 琼脂糖凝胶 HP

　　一、简介

　　DEAE- Crystarose Fast Flow是弱阴离子交换层析填料，它采用平均粒径为90um的多孔型琼脂糖通过化学键合阴阳离子功能配基形成，基团如下：

　　-O-CH2CH2-N+(C2H5)2H

　　其具有更高的比表面积和更好的生物兼容性，它再高流速下保持更高载量，同时又具有很高的分辨率。由于比表面积大，平衡和洗脱的时间也更短。

　　本产品特点：流速快、刚性强、载量高、物化稳定性好、寿命长、重复性好;容易放大。

　　二、产品技术指标：

　　测试坏境：柱内径5cm,高度15cm,压力1bar

　　三、应用的注意事项：

　　1)色谱柱填装

　　1、柱子装填前应在柱子下端加入小量的缓冲溶液，排出柱子内部的气泡，关闭柱子出口，在柱内保留少量的缓冲溶液。可以在里面加少许吐温避免气泡产生，也可以换成纯水装柱子。在装柱之前可用抽滤漏斗将胶用缓冲液或者纯净水抽洗3-5倍胶体积。

　　2、将填料倒入层析柱中，必要时可用玻璃棒紧靠柱子内壁引流，以减少气泡的产生，可让填料自然沉降，也可以装柱的过程中可以施加一定的压力加快装柱的速度，可以提高一定的柱效。注意在层析过程中的层析的最大流速要小于装柱时的流速。

　　3、在柱子装填前，填料从冰箱中取出后应在室温环境中放置 1-3 个小时，使之填料温度与环境温度保持一致，这样可以避免柱子装填时由于温度剧烈变化产生大量气泡，从而影响柱效。

　　2) 蛋白的结合

　　样品的盐浓度和 pH 要尽量和平衡柱子的缓冲液一致，盐浓度过高或者 pH 过低都有可能影响结合挂柱效果，所以要根据自己的样品做适当调整。

　　3) 蛋白的洗脱

　　1、离子交换一般是低盐吸附高盐洗脱。如果采用线性梯度洗脱，上样量应控制在柱填料总载量的10%或更低，上样量低，可以有效提高分离效果，样品浓度不宜过高。如果采用阶段洗脱的方法，上样量可以控制在柱总载量30%左右。阶段洗脱相对更容易放大，重复性好。离子交换层析柱子装填高度一般不超过30cm,要增加柱子规模只增加柱子直径便可。线性梯度洗脱和阶段洗脱方法各有优缺点，一般线性梯度洗脱方法适合摸索洗脱条件，而阶段洗脱适合大规模纯化。

　　四、再生、清洗

　　层析柱用完后用 0.2-0.5M NaOH (可添加1M NaCl)、DH?2O和0.1-0.2M HCL循环清洗 3-5 个床体积，再用1M NaCL平衡至PH中性用纯水和20%各冲洗3个柱床体积后保存。步骤：先用NaOH清洗3-5个柱体积，再用水洗3--5 个柱床体积，然后再用HCL清洗3---5个柱体积。如果遇到顽固的物质用上述方法无法洗脱的话，可以在清洗液中加入适当的去污剂，液可以直接用6M盐酸胍或者8M尿素清洗柱子。最后 20%的乙醇流洗 5 个柱床体积并保存。

　　五、保存

　　在 20%乙醇中，4℃下长期保存。