磷酸化蛋白提取试剂盒
产品货号：15231
产品规格：50T/100T
产品简介：
本试剂盒用于哺乳动物组织和细胞中提取胞质蛋白，试剂盒中的裂解液含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂，
作用较为强烈，可获得总蛋白，可用于免疫印迹实验等基础研究实验，由于含有上述的酶抑制剂，不能用于研究
蛋白激酶和磷酸激酶的研究。本品仅用于科研。
产品组成：
试剂名称50T100T保存条件
裂解液50mL100mL2~8℃
磷酸酶抑制剂（100×）0.5mL1mL-20℃
蛋白酶抑制剂（100×）0.5mL1mL-20℃
PMSF（100×）0.5mL1mL-20℃
操作步骤：
在1mL的冷裂解液中各加入10µL的磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和PMSF；混匀，放置在冰上备用；
1.组织总蛋白的提取
1)称取0.1g的新鲜组织，放置于玻璃匀浆器的入口缓冲处，用眼科剪将组织块尽可能的剪碎，然后加入0.5-1mL
的新配置的裂解液，研磨直至没有明显的组织块，这个过程注意冰上操作；
2)将组织匀浆液移入1.5mL的EP管中，4℃12000g离心30min；
3)吸取上清至新的管中；
4)进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。
（提取好的蛋白建议保存于-80℃，即用即取，避免反复冻融，避免长时间储存。）
2.细胞总蛋白的提取
1)裂解液的用量：10
7个细胞需要裂解液1mL；
2)贴壁细胞：弃去培养基，用冷的PBS洗两次，弃去PBS，然后加入计算好的细胞裂解液；在冰上用细胞刮刀
进行刮离细胞，将刮离的细胞裂解液移入EP管中，颠倒裂解20-30min。
3)悬浮细胞：4℃400g离心收集细胞，用冷的PBS洗两次细胞，同样按细胞数加入裂解液，涡旋10s，放置冰
上裂解10min，重复3-4次；
4)裂解完毕之后，将细胞裂解液4℃12000g离心30min；
5)将上清移入新的EP管中；进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。
（提取好的蛋白建议保存于-80℃，即用即取，避免反复冻融，避免长时间储存。）
注意事项：
1.实验过程，所有试剂都要需要预冷或者即融，保证操作过程中的低温环境。
2.PSMF（有毒）现用现加，因为PMSF在水溶液中会快速降解。
有效期：12个月有效。