植物基因组DNA 快速提取(50 次)实验步骤
植物基因组DNA 快速提取(50 次)
概述:
本方法可用于植物细胞DNA 的快速提取,可提取107 细胞,其质量能够满足各种分子生物学要求。
组成:
1.溶液A 1.2ml RNase A 10mg/ml。-20℃保存
2.溶液B 60ml
3.溶液C 180ml
4.溶液D 3ml Resin 用时充分混匀
5. 溶液E 50ml 洗液(用前加入75ml 无水/酒精,充分混匀)
6.溶液F 25ml TE buffer
步骤:
1. 组织≤0.1g,液氮研磨,加入0.3ml 溶液B,反复混匀,室温5min。
2. 加入0.8ml 溶液C,溶液A 20μl,充分混匀,室温放置20min。
3. ≥8000rpm 离心3min。
4. 取上清,加入50ul 溶液D,室温放置5min,≥8000rpm 离心1min,弃上清。
5. 加入800μl 溶液C,混匀,≥8000rpm 离心1min,弃上清。
6. 加入1ml 溶液E,混匀,≥8000rpm 离心30-60s,弃上清。
7. 重复步骤6。
8. ≥12000rpm,离心30-60s,吸干上清,室温敞开盖晾干约5-10min。
9. 取溶液F 200-300μl,混匀,40-50℃水浴3-5min。
10. ≥12000rpm 离心30-60s,取上清,即为DNA。
注:
1. 组织若多,可适当加大溶液B 和溶液D 的用量,其它成份不变。
2. 混匀一定要温和,否则DNA 大分子将被打断,而部分降解。
3. 适用新鲜组织、嫩组织,尽可能去除叶脉、叶柄。
4. 液氮研磨一定要保证组织在研磨过程中形如干粉状。
5. 用户可依实验需要,适当调整溶液F 加入量,溶液F 越少,DNA 浓度越高,但产量略有损失,若想最大限度提高产量,可重复步骤9、10。两次所得DNA 可合在一处。
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