鱼免疫球蛋白E（IgE）ELISA检测试剂盒2022已更新
解决方案摘要
产品配置单
解决方案详情
检测原理
试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被鱼免疫球蛋白E（IgE）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的鱼免疫球蛋白E（IgE）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37°C恒温箱
操作注意事项
1. 试剂盒保存在2-8°C，使用室温平衡60分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶wan全溶解后再使用。样本在使用也要在室温平衡60分钟。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3. 预处理后的样本无需稀释，直接取10μL加样即可。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用充分摇匀。
试剂盒组成
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名称
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96孔配置
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48孔配置
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备注
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微孔酶标板
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12孔×8条
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12孔×4条
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无
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标准品
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0.2毫米
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0.2毫米
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无
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样本稀释液
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7毫米
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2 毫米
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无
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检测抗体-HRP
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10毫升
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4毫米
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无
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20×洗涤缓冲液
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24毫米
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14毫米
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按说明书进行稀释
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底物A
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7毫米
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2 毫米
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无
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底物B
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7毫米
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2 毫米
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无
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终止液
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7毫米
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2 毫米
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无
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封板膜
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2张
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2张
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无
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说明书
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1份
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1份
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无
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自封袋
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1个
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1个
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无
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注：标准品浓度依次为：12、6、3、1.5、0.75、0 μ
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法
1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
操作步骤
1. 从室温平衡60min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4°C。
2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3. 待测样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL;
4. 随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37°C水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37°C避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
结果判断
绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。
试剂盒性能
1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。
2. 灵敏度：di检测浓度小于0.1 μg/mL。
3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性：板内变异系数小于10%、板间变异系数小于15%。
5. 贮藏：2-8°C，避光防潮保存。
6. 有效期：6个月
免责声明
1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。
2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。
仅供研究使用。
不适用于诊断程序。
鱼类免疫球蛋白E（IgE）ELISA试剂盒说明
预期用途
该IgE ELISA试剂盒仅用于研究实验室，不适用于诊断或治疗程序。S溶液将颜色从蓝色变为黄色，并使用分光光度计在450nm处测量颜色的强度。为了测量样品中IgE的浓度，该IgE ELISA试剂盒包括一组校准标准品。校准标准品与样品同时进行测定，并允许操作员产生光密度与IgE浓度的标准曲线。 然后通过将样品的外径与标准曲线进行比较来确定样品中IgE的浓度。
Sample collection ａnd storages
Serum - Use a serum separator tube ａnd allow samples to clot for 30 minutes before centrifugation for 10 minutes at approximately 3000×g. Remove serum ａnd assay immediately or aliquot ａnd store samples at -20℃ or -80℃.Avoid repeated freeze-thaw cycles
Plasma - Collect plasma using EDTA or heparin as an anticoagulant. Centrifuge samples for 30 minutes at 3000×g at 2-8℃ within 30 minutes of collection. Store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles.
Cell culture supernates ａnd other biological fluids - Remove particulates by centrifugation ａnd assay immediately or aliquot ａnd store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles.
Note: The samples should be centrifugated adequately ａnd no hemolysis or granule was allowed.
Materials required but not supplied
1. Standard microplate reader(450nm)
2. Precision pipettes ａnd Disposable pipette tips.
3. 37 ℃ incubator
Precautions
1. Do not substitute reagents from one kit to another. Standard, conjugate and microplates are matched for optimal performance. Use only the reagents supplied by manufacturer.
2. Do not remove microplate from the storage bag until needed. Unused strips should be stored at 2-8°C in their pouch with the desiccant provided.
3. Mix all reagents before using.
Remove all kit reagents from refrigerator ａnd allow them to reach room temperature ( 20-25°C)
Materials supplied
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Name
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96 determinations
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48 determinations
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Microelisa stripplate
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12*8strips
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12*4strips
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Standard
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0.3ml
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0.3ml
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Sample diluent
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6.0ml
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3.0ml
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HRP-Conjugate reagent
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10.0ml
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5.0ml
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20X Wash solution
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25ml
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15ml
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Chromogen Solution A
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6.0ml
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3.0ml
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Chromogen Solution B
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6.0ml
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3.0ml
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S Solution
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6.0ml
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3.0ml
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Closure plate membrane
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2
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2
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User manual
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1
|
1
|
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Sealed bags
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1
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1
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Note: Standard concentration was followed by:
12、6、3、1.5、0.75、0 μg/mL.
Reagent preparation
20×wash solution:Dilute with Distilled or deionized water 1:20.
Assay procedure
1. Prepare all reagents before starting assay procedure. It is recommended that all Standards and Samples be added in duplicate to the Microelisa Stripplate.
2. Add standard: Set Standard wells, testing sample wells. Add standard 50μl to standard well.
3. Add Sample: Add testing sample 10μl Then add sample diluent 40μl to testing sample well; Blank well doesn’t add anyting.
4. Add 100μl of HRP-conjugate reagent to each well, cover with an adhesive strip and incubate for 60 minutes at 37°C.
5. 吸出每个孔并洗涤，重复该过程四次，总共进行f次洗涤。使用喷射瓶，歧管分配器或自动洗涤器用洗涤溶液（400μl）填充每个孔进行洗涤。在每个步骤中完全去除液体对于粘液性能至关重要。最后一次洗涤后， 通过吸气或倾析除去任何剩余的洗涤溶液。倒置盘子并将其印在干净的纸巾上。
6. 向每个孔中加入发色剂溶液A 50μl和发色剂溶液B 50μl。 轻轻混合并在37°C下孵育15分钟。 避光。
7.向每个孔中加入50μl S溶液。孔中的颜色应从蓝色变为黄色。如果孔中的颜色是绿色或颜色变化不
显得均匀，轻轻敲击板材，确保充分混合。
8. Read the Optical Density （O.D.）at 450 nm using a microtiter plate reader within 15 minutes.
C 型结果
1.该标准曲线用于确定未知样品中的量。标准曲线是通过绘制垂直（Y）轴上六种标准浓度中的每一种获得的平均外径（450nm）与水平（X）轴上的相应浓度来生成的。
2. 首先，计算每个标准品和样品的平均外径值。所有外径值在结果解释之前，都减去零标准的平均值。使用图表纸或统计软件构建标准曲线。
3. 要确定每个样品中的量，首先在Y轴上找到外径值，并将水平线延伸到标准曲线。在交点处，绘制一条到 X 轴的垂直线并读取相应的浓度。
4. 操作器、移液和洗涤技术、孵育时间或温度以及试剂盒年龄的任何变化都可能导致结果变化。每个用户都应该获得自己的标准曲线。
5.该测定的灵敏度为0.1 μg / mL。
6. 标准曲线
施暴度：2-8°C。
有效期：六个月。
仅用于研究用途;不适用于治疗或诊断应用！ 在开始之前，请通读整个过程！
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