【生化诊断原料酶】肌酐酶
肌酐酶
Creatinine amidohydrolase
Creatinine + H2O ⇋Creatine
酶学性质
主要用途:用于临床研究中肌酐酶法检测
最适pH
37℃, buffer solution:
pH 6.0-7.5, Na-phosphate;
pH7.5-9.0, Tris-HCl; pH 9.0-10, Glycine-NaOH.
Enzyme concentration: 1 mg/mL.
最适温度
10 min-reatcion in K-phosphate buffer pH 8.0.
Enzyme concentration: 1 mg/mL.
pH稳定性
25℃,120 min-treatment with 100 mM buffer solution:
pH 5.0-6.0, Acetate; pH 6.0-7.5, Na-phosphate;
pH7.5-9.0, Tris-HCl; pH 9.0-10, Glycine-NaOH.
Enzyme concentration: 1 mg/mL.
热稳定性
60 min-treatment with 100 mM
Tris-HCl buffer, pH 8.0.
Enzyme concentration: 1 mg/mL.
稳定性 (-20℃保存)
活性测定方法
原理:肌酐在肌酐酶催化下生成肌酸,通过检测反应液525 nm处吸光度值变化,测定产物生成量。
酶活定义:单位酶活定义为在下述条件下每分钟催化生成1微摩尔肌酸所需的酶量。
试剂准备
试剂 I:磷酸钾buffer,0.3 M,pH 8.0。
试剂 II:肌酐溶液,0.1 M。
试剂 III:碳酸钠溶液,浓度为4%。
试剂 IV:α-萘酚溶液,浓度为2%,溶于无水乙醇中。
试剂 V:碱性溶液,含1.2%氢氧化钠和3.2%碳酸钠。
试剂 VI:二乙酰溶液,浓度为0.05%。
操作步骤
1. 取0.1 mL试剂 I与0.8 mL试剂 II在5 mL EP管中混匀,37℃孵育5 min。
2. 加入0.1 mL酶液,37℃孵育10 min。
3. 加入2.0 mL试剂 III,混匀,并将反应EP管置于冰水中。
4. 吸取步骤3中的混合液0.1 ml,依次添加0.9 mL双蒸水,0.5 mL试剂 IV,0.5 mL试剂 V和0.5 mL试剂 VI。
5. 25℃放置1小时,并添加2.5 mL双蒸水稀释。
6. 读取525 nm处吸光度值。
向反应液中加入0.1 mL 10 mM磷酸钾缓冲液(代替酶液),相同条件下测定吸光度值,设定为空白对照。
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