用户之声 |层浪流式遍布大江南北助力精子检测

“值得信赖的流式伙伴”，是层浪生物一直致力追求的目标。因此近期我们对层浪客户的回访做一个分析和总结，我们也期待您主动反馈给我们您的使用评价。下面是来自国内知名第三方检测机构采购了层浪LongCyte^TM 流式细胞仪的使用反馈。

下面给大家介绍来自此用户的项目——精子碎片化检测

2023年，世界卫生组织（WHO）的一份报告显示，全球约有17.5%的适龄生育夫妇受不孕不育的困扰。根据国家统计局数据，我国不孕不育率约为12%-18%，其中男方原因占40%-50%左右，精子原因居首位。精子DNA碎片（Sperm DNA fragmentation, SDF）在男性不孕症中发生率较高，SDF常伴发少弱精子症，也可发生于常规精液指标正常的不育症患者。其发生机制包括精子成熟障碍、凋亡异常和氧化应激过高等。精子碎片化检测是精子检测中最重要的评估指标之一。

精子SDF的检测有很多方法，分为直接法和间接法，直接法有TUNEL、Coment、ISNT;间接法有SCSA、SCD、DBD-FISH。流式常用方法是SCSA（精子染色质结构分析）检测，与其他检测方法相比，流式细胞术可以在相对较短的时间内分析数千、数万个细胞，显著提高了SDF试验的可靠性。在SCSA检测中重要指标是精子DNA完整性(DFI)，即精子DNA碎片率。DFI是指精子在形成过程中受到某些有害因素(如吸烟、高温、药物等)影响，发生DNA链断裂的精子占全部精子的百分比，使精子DNA完整性被破坏而产生断裂，DFI值越高则生育能力越低。

检测原理：

SCSA 被认为是检测精子 DNA 损伤的金标准。其原理是：受损的精子DNA 在酸的作用下变性形成单链，而正常精子DNA维持双链结构。吖啶橙( AO) 与双链 DNA结合发出绿色荧光，而与单链DNA结合发出红色荧光。发绿色荧光表示精子DNA完整，发红色荧光代表精子DNA呈碎片化。

样本准备（来自客户）：

1. 样本在室温液化30-60min；

2. 将4℃保存试剂A液、B液、C1液和C2液取出，C2离心后，将C2全部转移至C1内配成染色液；

3. 检测管内加入精子样本10μL,加入 A液90μL，充分吹打混匀；

4. 加入B液200μL，计时30s；

5. 30s后时加入染色液600μL；

6. 染色完成1min后上机检测，建议检测在染色后40min之内完成。

（注：实验步骤不同试剂厂家有差异）

检测报告：

图1. 精子检测报告（LongCyte^TM）

图示：Plot1，前散FSC和侧散SSC圈中主群；Plot2，去除碎片信号，圈精子细胞；Plot3，Green门为绿色荧光信号的精子细胞，Red门为已去除碎片的红色荧光信号的精子细胞，即Red门为DNA碎片化的精子细胞，高绿色荧光信号群（HDS）为MFI高于正常精子的信号。（注：Red检测通道ECD，620/30；Green检测通道FITC，530/30）

临床上除了精子碎片化检测以外；精子相关其他检测项目还有质膜完整性检测，线粒体膜染色、凋亡检测、活性氧检测、精子Ca2+ 水平检测、白细胞检测、顶体反应等。层浪流式细胞仪助力更多精子检测相关的研究和临床项目。层浪期望与更多生殖机构联手助力生殖检测发展。

参考资料：

[1] 倪吴花，AshokAgarwal，孙莹璞等，精子DNA 碎片检测的临床专家共识, 生殖医学杂志2023年2月第32卷第2期, 1004-3845.2023.02.002

[2] 精子碎片实验室检测与临床应用专家共识编写组，精子碎片实验室检测与临床应用专家共识———基于流式细胞精子染色质结构分析，中华男科学杂志 2022 年 2 月 第 28 卷 第 2 期。

[3] Flow cytometry and microscopic acridine orange test: relationship with standard semen analysis [J]. Reproductive BioMedicine Online, 2004, 8(4): 398-407.