NK-92与NK-92MI培养注意要点
NK-92细胞是从一位患有急进性非霍奇金淋巴瘤的50岁白人男性外周血单核细胞衍生来的一株IL-2依赖型NK细胞株。NK-92MI细胞是转染得到的源自NK-92细胞的IL-2非依赖的NK细胞株。
NK-92细胞是从一位患有急进性非霍奇金淋巴瘤的50岁白人男性外周血单核细胞衍生来的一株IL-2依赖型NK细胞株。NK-92MI细胞是转染得到的源自NK-92细胞的IL-2非依赖的NK细胞株。亲本细胞NK-92通过微粒体基因转化法用逆转录病毒MFG-hIL-2载体携带的人IL-2cDNA进行转化。可能由于载体整合到基因组DNA中，转化是稳定的。这株细胞对很多恶性细胞有细胞毒性；铬释放试验显示它能杀死K562细胞和Daudi细胞。NK-92细胞有以下特征：CD2、CD7、CD11a、CD28、CD45、CD54表面标记阳性；CD1、CD3、CD4、CD5、CD8、CD10、CD14、CD16、CD19、CD20、CD23、CD34和HLA-DR表面标记阴性。其亲本IL-2依赖的细胞株NK-92细胞及另一株同样来源于NK-92细胞株的IL-2非依赖的细胞株NK-92CI都可从ATCC得到。NK-92MI细胞和NK-92CI细胞这两个变种都包含、表达并合成hIL-2cDNA。NK-92MI细胞合成的IL-2水平比NK-92CI高，而亲本细胞不合成表达。
➊ NK-92细胞为悬浮生长，大部分细胞聚集成团，少数细胞分散，并且细胞间隙会有较多的死细胞和细胞碎片;
➋ NK-92细胞对IL-2敏感。培养基中IL-2降解，将导致细胞状态变差。IL-2在-20℃解冻后置于4℃冰箱保存，4℃保存不应超过一周。配制好的新鲜培养基要尽快用完，建议每次使用前拿出来预热，使用完毕后放回4℃冰箱保存；
➌ NK-92细胞对离心敏感。正常培养时，换液周期为2~3天，建议交替使用半量换液和离心换液法，即半量换液2~3次后，离心全量换液一次。尽量减少离心次数，细胞状态不佳或细胞量少的时候，一般不建议离心；
➍ NK-92细胞对机械力较敏感。正常培养时，应尽量避免吹打力道过大。暴力吹打会使死细胞和细胞碎片增加。
➎ 正常培养时，NK-92细胞团的间隙有部分死细胞和细胞碎片是正常的，如细胞碎片过多，可通过低速离心去除部分细胞碎片（800rpm,5min）。
➏ 血清质量差异可能引起细胞状态变化，建议选用高质量的胎牛血清。
➐ 细胞生长时，聚集的细胞团会逐渐增大，正常的细胞团在显微镜下呈现白色透亮状。若细胞聚集太多，出现细胞团中部发暗时，可传代；
➑ 细胞对培养液营养要求很高，在正常培养过程中应避免细胞团块太大，这会导致营养不足；细胞团块过大时，需要稍微吹散，注意控制吹打次数，不需刻意吹散成单个细胞。
➒ NK-92的传代方法：将细胞团用移液器轻轻吹散，均分到两个瓶子里，每瓶再补充等量培养基。
➓ NK-92的冻存方法：细胞冻存的时候，细胞需要尽量分散，否则影响冻存效果。
➊ NK-92MI细胞为悬浮生长，大部分细胞聚集成团，少数细胞分散，并且细胞间隙会有较多的死细胞和细胞碎片；
➋ NK-92MI细胞对离心敏感。正常培养时，换液周期为2~3天，建议交替使用半量换液和离心换液法，即半量换液2~3次后，离心全量换液一次。尽量减少离心次数，细胞状态不佳或细胞量少的时候，一般不建议离心；
➌ NK-92MI细胞对机械力较敏感。正常培养时，应尽量避免吹打力道过大。暴力吹打会使死细胞和细胞碎片增加。
➍ 正常培养时，NK-92MI细胞团的间隙有部分死细胞和细胞碎片是正常的，如细胞碎片过多，可通过低速离心去除部分细胞碎片（800rpm,5min）。
➎ 血清质量差异可能引起细胞状态变化，建议选用高质量的胎牛血清。
➏ 细胞生长时，聚集的细胞团会逐渐增大，正常的细胞团在显微镜下呈现白色透亮状。若细胞聚集太多，出现细胞团中部发暗时，可传代；
➐ 细胞对培养液营养要求很高，在正常培养过程中应避免细胞团块太大，这会导致营养不足；细胞团块过大时，需要稍微吹散，注意控制吹打次数，不需刻意吹散成单个细胞。
➑ NK-92MI的传代方法：将细胞团用移液器轻轻吹散，均分到两个瓶子里，每瓶再补充等量培养基。
➒ NK-92MI的冻存方法：细胞冻存的时候，细胞需要尽量分散，否则影响冻存效果。
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